论文部分内容阅读
冠心病是危害中、老年人的严重疾病之一,在许多国家和地区的发病率和死亡率都很高,已成为严重危害人类健康的疾病。因此,抗冠心病药物的研究在世界各国日益受到重视。我国传统方药对冠心病保护作用的研究也日益受到重视。对冠心病的研究,建立理想的动物模型必不可少。本实验室选用中国实验小型猪采用介入法球囊拉伤冠状动脉左前降支配合高脂饲料喂养,获得痰瘀互结证冠心病模型,其病理过程与人类极相似。本实验室在中国小型猪痰瘀互结证冠心病模型上,选用瓜蒌薤白半夏汤合血府逐瘀汤作为痰瘀同治方、瓜蒌薤白半夏汤作为化痰方、血府逐瘀汤作为祛痰方进行治疗,对此模型给予三种不同的传统方药,探讨了方证相应理论的规律与本质(详见李欣志博士论文)。本实验在此基础上,对此模型的冠状血管损伤节段和梗死交界区心肌,进行病理形态学分析;并观察传统方药对冠状动脉及心肌的病理形态学的干预作用。并观察心肌凋亡细胞及bax、bcl—2、caspase-3、caspase-9表达在模型中的变化,并观察传统方药对心肌凋亡细胞及bax、bcl—2、caspase-3、caspase-9表达的干预作用。材料和方法:30只中国实验小型猪(Chinese experimental miniature swine,CEMS)随机分为6组:(1)正常对照组(Con):普通饲料,不拉伤冠状血管,n=5;(2)痰瘀互结证候模型组(Model):冠状动脉拉伤+高脂饲料,n=5;(3)西药对照组(XY):冠状动脉拉伤+高脂饲料+辛伐他汀0.5mg/kg,n=5;(4)化痰组(HT):冠状动脉拉伤+高脂饲料+瓜蒌薤白半夏汤6g生药/kg,n=5;(5)祛瘀组(QY):冠状动脉拉伤+高脂饲料+血府逐瘀汤8g生药/kg,n=5;(6)痰瘀同治组(TY):冠状动脉拉伤+高脂饲料+瓜蒌薤白半夏汤3g生药/kg合血府逐瘀汤4g生药/kg,n=5。冠状动脉拉伤后第2天开始给药,同时继续喂养高脂饲料,持续8周。实验结束后,取实验各组的冠状血管损伤节段和梗死交界区心肌制成石蜡切片。用H.E染色法、弹力纤维EVG染色法、计算机图像分析系统、用SPSS11.5统计软件对受损血管管腔内膜增生及狭窄情况进行形态学观察、数据测量和数据统计分析;用H.E染色法和Masson三色染色法对受累心肌进行形态学分析。用TUNEL标记法识别心肌凋亡细胞,用免疫组织化学染色法表达bax、bcl—2基因蛋白和caspase-3、caspase-9蛋白酶,观察心肌凋亡细胞及bax、bcl—2、caspase-3、caspase-9表达在模型中的变化,并观察中药方剂对心肌细胞凋亡及bax、bcl—2、caspase-3、caspase-9表达的影响。结果:1、模型组冠状动脉管腔出现不同程度的偏心性狭窄,与对照组相比,差异极显著(P＜0.01)。各给药组冠状动脉管腔仍有不同程度的狭窄,但与模型组有显著减轻,其中化痰组、祛瘀组、痰瘀同治组有极显著差异(P＜0.01),西药组有明显差异(P＜0.05)。2.模型组心肌内可见大片状心肌纤维断裂缺失,并被纤维组织填充替代,部分伴灶状肌纤维变性坏死、脂肪浸润及少数炎性细胞浸润,与对照组相比,差异极显著(P＜0.01)。各给药组,较模型组有明显减轻,其中化痰组、西药组有极显著差异(P＜0.01),祛瘀组、痰瘀同治组有明显差异(P＜0.05)。3.用计算机图像分析软件测量冠状动脉并进行统计学分析发现:模型组管腔与对照组管腔相比显著狭窄(P＜0.01);模型组的管腔最大内膜厚度与对照组相比明显增厚(P＜0.01);模型组的管腔最大内膜厚度与中膜厚度的比值明显大于对照组(P＜0.01)。各给药组冠状动脉管腔狭窄程度明显轻于模型组(P＜0.01);各给药组的管腔最大内膜厚度明显比模型组薄(P＜0.01);各给药组的管腔最大内膜厚度与中膜厚度的比值显著小于模型组(P＜0.01)。4.模型组bcl-2基因蛋白表达和bcl-2/bax的比值均明显低于对照组(P＜0.01),bax基因蛋白表达比对照组明显增强(P＜0.01);痰瘀同治组bcl-2基因蛋白表达和bcl-2/bax的比值均显著高于模型组(P＜0.01),bax基因蛋白表达较模型组显著降低(P＜0.01)。5.模型组caspase-3、caspase-9表达均明显比对照组增强(P＜0.01);痰瘀同治组caspase-3、caspase-9表达均显著低于模型组(P＜0.01)。6.TUNEL法检测各组心肌细胞凋亡情况:对照组、模型组及痰瘀同治组的凋亡指数(apoptosis index,AI)分别为0.92%、27.68%及17.28%,模型组和痰瘀同治组的凋亡细胞数均比对照组的多,凋亡指数均大于对照组(P＜0.01);模型组和痰瘀同治组相比,前者的凋亡细胞数明显多于后者且凋亡指数也大于后者(P＜0.01)。结论1.从病理学角度证实了中国小型猪痰瘀互结证冠心病模型的成立。2.传统方药对痰瘀互结证冠心病模型有明显的防治效果。3.传统方药对缺血心肌凋亡细胞有明显的保护作用。