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目的:通过观察精简平喘方对支气管哮喘模型小鼠白细胞介素-4、白细胞介素-5、干扰素-γ水平,总免疫球蛋白E及T-bet、GATA-3的影响,探索支气管哮喘Th1/Th2极化的细胞内信号转导途径,以及精简平喘方对支气管哮喘模型小鼠Th1/Th2失衡的调控作用和免疫学机制。
方法:通过对BALB/c小鼠腹腔注射卵清白蛋白致敏和雾化吸入激发,建立支气管哮喘模型。将120只BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型组、精简平喘方组和地塞米松组。于第14天至第39天,空白对照组和模型组以生理盐水灌胃,精简平喘方组和地塞米松组分别予以精简平喘方溶液和地塞米松溶液。各组分别于激发7天和14天处死、取样。采用酶联免疫吸附测定法检测血清总IgE水平;荧光流式细胞术检测血清和BALF中IL-4、IL-5及IFN-γ水平;荧光定量PCR检测肺组织T-bet和GATA-3mRNA并观察各组小鼠肺组织病理学变化。
结果:激发7天时,与空白对照组比较,模型组、精简平喘方组及地塞米松组IgE、GATA-3 mRNA显著升高(P<0.01)、T-bet mRNA显著降低(P<0.01);血清及BALF中IL-4、IL-4/IFN-γ均显著升高(P<0.01或P<0.05),IFN-γ均显著降低(P<0.01或P<0.05);模型组及精简平喘方组血清和BALF中IL-5水平显著升高(P<0.01;P<0.05, P<0.01),地塞米松组BALF中IL-5水平显著升高(P<0.01)。激发14天时,与空白对照组相比,模型组IgE、IL-4、IL-5、IL-4/IFN-γ、GATA-3mRNA显著升高(P<0.01), IFN-γ、T-bet mRNA显著降低(P<0.01);精简平喘方组BALF中IL-5、IL-4/IFN-γ显著上升(P<0.01, P<0.05),血清IFN-γ、T-betmRNA显著降低(P<0.01)。激发7天和14天时,精简平喘方和地塞米松组可显著降低模型组总IgE(P<0.01), IL-5(P<0.01或P<0.05),IL-4、IL-4/IFN-γ(P<0.01,P<0.01), GATA-3 mRNA(P<0.01),显著升高IFN-γ(P<0.01或P<0.05)及T-betmRNA(P<0.01);地塞米松组与精简平喘方组之间均无显著性差异(P>0.05);肺组织T-bet/GATA-3与血清及BALF中IFN-γ/IL-4均具有一定的正相关(P<0.01)。
结论:经卵蛋白腹腔注射致敏和雾化吸入激发可使哮喘模型小鼠血清总IgE、血清及BALF中IL-4、IL-5水平显著升高,IFN-,γ水平显著降低,这种变化在哮喘激发早期(7天时),可持续存在(14天时)。精简平喘方对激发早期(激发7天时)哮喘模型小鼠疗效显著,能减轻其发作症状,显著降低IgE、IL-4、IL-5水平及GATA-3mRNA,显著升高IFN-γ水平及T-betmRNA,改善哮喘模型小鼠气道炎症,其疗效与地塞米松相似,并持续存在(激发14天时)。激发7天和激发14天时,肺组织T-bet/GATA-3与血清、BALF中IFN-γ/IL-4均存在一定的正相关性。哮喘模型小鼠经腹腔致敏和雾化激发后存在IFN-γ/IL-4和T-bet/GATA-3比值降低,Th1/Th2失衡;经治疗后IFN-γ/IL-4和T-bet/GATA-3均有所提高,对Th1/Th2失衡有纠正作用。精简平喘方采用化痰祛瘀平喘之法,针对哮喘之夙根“伏痰”及瘀血,干预Th1/Th2失衡,是治疗哮喘的有效方剂。