【摘 要】
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该研究以中国赖型017钩体基因组DNA为模板,用PCR技术扩增出其外膜蛋白OmpL1基因,通过定向克隆法,以E.coli-BCG穿梭载体pMV261,pMV361,pY6002为基础构建了三个表达质粒pBQ1,pB
【出 处】
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华西医科大学 四川大学华西医学中心 四川大学
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该研究以中国赖型017钩体基因组DNA为模板,用PCR技术扩增出其外膜蛋白OmpL1基因,通过定向克隆法,以E.coli-BCG穿梭载体pMV261,pMV361,pY6002为基础构建了三个表达质粒pBQ1,pBQ2和pBQ3,通过电穿孔方法将三个重组质粒转入卡介苗中获得了具有卡那霉素抗性的重组卡介苗.其中含有pBQ<,1>、pBQ<,2>的重组卡介苗经45℃热诱导表达后,SDS-PAGE分析菌体总蛋白显示在约35kb处有新的蛋白带出现,与文献报道相符.说明该重组载体能在卡介苗中表达出OmpL1融合蛋白.该研究为钩体外膜基因重组穿梭质粒构建及其在卡介苗的表达提供了完整的实验数据,并为进一步研究重组钩体卡介苗疫苗的免疫原性及免疫保护作用,进而发展安全高效、持久的钩体重组卡介苗疫苗奠定了基础.
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