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研究背景 过量饮酒是当今世界范围内一个重要的社会公共卫生问题，且饮酒的年轻人越来越多。长期大量饮酒对骨骼系统有损害作用，但其机制仍不十分清楚。酒精对成骨细胞有直接作用，慢性饮酒者存在的营养不良及小血管病变，加重了酒精的毒性作用。血清饥饿条件下，体外培养成骨细胞在酒精干预后增殖和功能的改变，直接反映了体内损伤机制。慢性饮酒人群血清胰岛素样生长因子-I（IGF-I）水平降低，酒精还抑制了IGF-I受体酪氨酸激酶磷酸化。IGF-I促进成骨细胞的增殖和分化，外源性IGF-I对成骨细胞的保护可能使其成为预防和治疗酒精引起骨损害的有效方法。凋亡是细胞在不同条件下进行的自发性死亡，多种因素对凋亡的影响调节了成骨细胞活性。Bcl-2、Bax分别是凋亡抑制基因和凋亡促进基因的代表，其表达决定了凋亡的发生。 第一章 大鼠成骨细胞体外分离培养及其功能鉴定 目的：改良组织块培养法，体外分离培养新生大鼠成骨细胞，进行功能鉴定，为实验研究提供高纯度的成骨细胞。 方法：无菌条件下取新生大鼠颅骨骨片，首先以0.25％胰蛋白酶／0.02％EDTA消化20 min，再按照传统组织块培养法操作，接种到含15％新生牛血清DMEM中，37℃，5％CO2培养，倒置相差显微镜下观察。将分离的细胞采用差速黏附法纯化后传代培养，分别进行Ⅰ型胶原SP法免疫细胞化学染色，细胞内碱性磷酸酶钙钴法染色，钙结节茜素红S染色，细胞内碱性磷酸酶活性测定，RT-PCR检测骨钙素mRNA表达。 结果：改良组织块培养法培养第3 d有细胞移出，贴壁生长并逐渐增多，8 d后融合达80％。培养获得的细胞形态学呈梭形、多角形，纯化后Ⅰ型胶原有较高表达，碱性磷酸酶染色阳性率90％以上，高于纯化前（P＜0.05）。后期细胞呈多层聚集生长，28 d后矿化形成钙结节，茜素红S染色呈橘红色。细胞内碱性磷酸酶活性随时间呈上升趋