本文以细脚虫草Cordyceps tenuipes C322和蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces hepiali C370B2菌株为对象,利用芦笋制作培养基进行菌丝体培养。发现不同时期,不同浓度的变化差异,最终对菌丝体及培养基的化学成分变化进行研究,以不同生长阶段的生物量与化学成分变化的相关性为指导,选取优良高产菌株,优化培养条件,优化最佳培养时间,以提高菌丝体功效成分提供科学依据。按照培养基不同浓度设定梯度,筛选芦笋5%浓度进行培养,分析比较两种菌株不同生长阶段及其培养基,揭示12种化学成分(包括多糖、总皂苷、总黄酮、麦角甾醇、胞嘧啶、尿嘧啶、尿苷、2’-脱氧尿苷、鸟苷、腺嘌呤、腺苷和2’-脱氧腺苷等)变化规律及其化学成分分布式样。主要研究成果如下:1细脚虫草和蝙蝠蛾拟青霉菌丝体通过芦笋和纯净水培养,设置浓度梯度,观察菌丝体生长。细脚虫草培养前35天,其生物量呈现明显递增;35天以后菌丝体生物量增长趋势降低,菌丝体逐渐呈衰退状态,60天后有粉状分生孢子出现。还观察到蝙蝠蛾拟青霉菌丝体培养前45天,其生物量逐渐增长,45天以后菌丝体开始衰退,70天后开始有分生孢子出现。通过观察细脚虫草和蝙蝠蛾拟青霉菌丝体生物量变化趋势和培养时间,结合培养基不同浓度梯度,绘制曲线图,揭示出培养时间、培养基浓度与菌丝体生物量三者的相关性。结果显示,在菌丝体生长过程中,两个菌株均存在生物量先升高再持平最后降低的规律;芦笋培养基浓度为5%、7%、9%时,两种菌株菌丝体的生物量相对均较大,本次实验选用5%浓度的芦笋培养基配方。同时通过测定菌丝体生物量得出最佳培养时间是,细脚虫草为25-30天,蝙蝠蛾拟青霉为35-40天。2以5%浓度的芦笋培养细脚虫草和蝙蝠蛾拟青霉菌丝体,分析不同阶段菌丝体和芦笋培养基化学成分动态变化,得出以下结论:对于细脚虫草而言,细脚虫草菌丝体生物量在第40天达到最大值(2.84g),芦笋培养基的生物量在第10天达到最大值(4.86g);以多糖为例,菌丝体多糖在第30天达到最大值(3.36mg/g),芦笋培养基多糖含量在第55天达到最大值(4.36mg/g);菌丝体皂苷在第40天达到最大值(19.53mg/g),芦笋培养基的皂苷含量在第70天达到最大值(29.99mg/g);以总黄酮为例,菌丝体黄酮在第50天达到最大值(1.97mg/g),芦笋培养基的黄酮含量在第45天达到最大值(7.1mg/g);以胞嘧啶为例,菌丝体胞嘧啶在第30天达到最大值(7.313mg/g),芦笋培养基的胞嘧啶含量在第40天达到最大值(3.424mg/g);以尿嘧啶为例,菌丝体尿嘧啶在第30天达到最大值(7.329mg/g),芦笋培养基的尿嘧啶含量在第25天达到最大值(3.383mg/g);以尿苷为例,菌丝体尿苷在第70天达到最大值(7.214mg/g),芦笋培养基的尿苷含量在第40天达到最大值(3.651mg/g);以2’-脱氧尿苷为例,菌丝体2’-脱氧尿苷在第15天为最大值(20.34mg/g),芦笋培养基的2’-脱氧尿苷含量在第70天达到最大值(5.00mg/g);以鸟苷为例,菌丝体鸟苷在第40天达到最大值(74.16mg/g),芦笋培养基的鸟苷含量在第10天达到最大值(32.04mg/g);以腺苷为例,菌丝体腺苷在第40天达到最大值(1179.13μg/g),芦笋培养基的腺苷含量在第10天达到最大值(649.23μg/g);以腺嘌呤为例,菌丝体腺嘌呤在第30天达到最大值(2199.7μg/g),芦笋培养基的腺嘌呤含量在第55天达到最大值(3383.80μg/g);以2’-脱氧腺苷为例,菌丝体2’-脱氧腺苷在第25天达到最大值(160.66μg/g),芦笋培养基的2’-脱氧腺苷含量在第50天达到最大值(3.15μg/g);以麦角甾醇为例,细脚虫草C322菌丝体麦角甾醇在第45天达到最大值(8987.83μg/g),芦笋培养基的麦角甾醇含量在第75天达到最大值(1854.00μg/g)。蝙蝠蛾拟青霉菌丝体生物量在第55天达到最大值(3.48g),芦笋培养基的生物量在第10天达到最大值(4.99g);菌丝体多糖在第40天达到最大值(3.22mg/g),芦笋培养基多糖含量在第10天达到最大值(4.99mg/g);菌丝体皂苷在第45天达到最大值(26.55mg/g),芦笋培养基的皂苷含量在第70天达到最大值(36.08mg/g);以总黄酮为例,菌丝体黄酮在第50天达到最大值(2.75mg/g),芦笋培养基的黄酮含量在第50天达到最大值(5.75mg/g);菌丝体胞嘧啶在第55天达到最大值(6.13mg/g),芦笋培养基的胞嘧啶含量在第40天达到最大值(2.677mg/g);以尿嘧啶为例,菌丝体尿嘧啶在第35天达到最大值(8.63mg/g),芦笋培养基的尿嘧啶含量在第25天达到最大值(5.072mg/g);以尿苷为例,菌丝体尿苷在第10天达到最大值(9.73mg/g),芦笋培养基的尿苷含量在第35天达到最大值(4.272mg/g);以2’-脱氧尿苷为例,菌丝体2f-脱氧尿苷在第55天为最大值(10.91mg/g),芦笋培养基的2’-脱氧尿苷含量在第50天达到最大值(5.23mg/g);以鸟苷为例,菌丝体鸟苷在第35天达到最大值(49.28mg/g),芦笋培养基的鸟苷含量在第10天达到最大值(10.29mg/g);以腺苷为例,菌丝体腺苷在第25天达到最大值(975.94μg/g),芦笋培养基的腺苷含量在第50天达到最大值(497.82μg/g);以腺嘌呤为例,菌丝体腺嘌呤在第70天达到最大值(1293.3μg/g),芦笋培养基的腺嘌呤含量在第40天达到最大值(5222.10μg/g);菌丝体2’-脱氧腺苷在第20天达到最大值(53.45μg/g),芦笋培养基未检出2’-脱氧腺苷含量;菌丝体麦角甾醇在第45天达到最大值(7547.46μg/g),其芦笋培养基麦角甾醇含量在第15天达到最大值(2379.09μg/g)。3随着培养时间的变化在0～90天的培养过程中,细脚虫草菌丝体与芦笋培养基中的总黄酮、胞嘧啶含量呈极显著的正相关性;细脚虫草菌丝体与芦笋培养基中的腺苷表现为极显著的负相关。蝙蝠蛾拟青霉与芦笋培养基中的总黄酮和胞嘧啶含量呈极显著的正相关性;蝙蝠蛾拟青霉与芦笋培养基中的腺苷含量呈极显著的负相关。4通过芦笋固体培养蝙蝠蛾拟青霉和细脚虫草,并对二者的菌丝体阶段、原基发生阶段和孢梗束成熟三个阶段的化学成分进行研究。通过分析发现最佳培养阶段如下:对于多糖而言,细脚虫草原基(39073.68μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉原基(34268.55μg/g);蝙蝠蛾拟青霉孢梗束(29102.52μg/g)>细脚虫草菌丝体(17998.06μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉菌丝体(15892.09μg/g)>细脚虫草孢梗束(14859.59μg/g)以总皂苷为例,细脚虫草原基(23818.65hμg/g)>细脚虫草菌丝体(13267.66μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉菌丝体(13143.69μg/g)>细脚虫草孢梗束(9125.25μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉孢梗束(8403.75μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉原基(1086.08μg/g);以总黄酮为例,细脚虫草原基(5589.23μg/g)>细脚虫草孢梗束(2741.62μg/g)>细脚虫草菌丝体(2461.45μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉菌丝体(1420.89μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉孢梗束(789.88μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉原基(30.91μg/g);以胞嘧啶为例,细脚虫草菌丝体(966.94μg/g)>细脚虫草原基(194.66μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉菌丝体(189.03μg/g)>细脚虫草孢梗束(120.24μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉原基(79.23μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉孢梗束(68.51μg/g);以尿嘧啶为例,细脚虫草孢梗束(165.23μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉菌丝体(155.85μg/g)>细脚虫草原基(146.00μg/g)>细脚虫草菌丝体(123.72μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉原基(56.9μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉孢梗束(47.86μg/g);以尿苷为例,细脚虫草原基(1445.77μg/g)>细脚虫草孢梗束(1149.77μg/g)>细脚虫草菌丝体(654.13μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉菌丝体(590.27μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉孢梗束(496.72μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉原基(477.63μg/g);以2’—脱氧尿苷为例,细脚虫草菌丝体(23.85μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉菌丝体(8.51μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉原基(6.91μg/g)>细脚虫草孢梗束(6.84μg/g)>细脚虫草原基(6.02μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉孢梗束(5.43μg/g);以鸟苷为例,细脚虫草孢梗束(1077.73μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉菌丝体(738.79μg/g)>细脚虫草菌丝体(645.43μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉孢梗束(429.14μg/g)>细脚虫草原基(250.62μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉原基(2.27μg/g);以腺嘌呤为例,细脚虫草孢梗束(47.08μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉菌丝体(42.06μg/g)>细脚虫草菌丝体(18.56μg/g)>细脚虫草原基(4.8μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉孢梗束(4.22μg/g),其余未检出;以腺苷为例,细脚虫草孢梗束(870.5μg/g)>蝠蛾拟青霉孢梗束(525.28μg/g)>细脚虫草原基(454.5μg/g)>细脚虫草菌丝体(13.17μg/g),其余未检出;以2’—脱氧腺苷为例,细脚虫草孢梗束(49.34μg/g)>细脚虫草菌丝体(19.93μg/g)>蝠蛾拟青霉孢梗束(19.38μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉菌丝体(7.96μg/g),其余未检出;以麦角甾醇为例,细脚虫草菌丝体(140.83μg/μ)>细脚虫草孢梗束(18.77μg/g)>蝙蝠蛾拟青霉原基(5.48μg/g),其余未检出。本文探明利用芦笋培养细脚虫草菌株C322和蝙蝠蛾拟青霉菌株C370B2菌丝体和培养基不同生长阶段生物量及其化学成分变化的规律。明确两种菌株不同生长阶段生物量及其化学成分分布格局,筛选出利用芦笋培养细脚虫草和蝙蝠蛾拟青霉菌丝体的培养条件,为下一步利用芦笋培养细脚虫草和蝙蝠蛾拟青霉菌丝体作为保健品提供了参考依据。