第一部分2例先天性角化不良患者的临床、免疫学特征及基因突变分析背景:先天性角化不良(Dyskeratosis congenita,DC)是由于端粒维持缺陷而引起的一种综合征。与DC相关的免疫缺陷可导致过早死亡,但DC患者,尤其是年轻患者的免疫学特征和分子特征尚未被详细描述。目的:分析我院就诊的2例先天性角化不良患者的临床资料,端粒相对长度、基因突变位点信息以及详细的免疫学表型,旨在为DC患者早期诊断、免疫评估以及针对性的免疫治疗提供信息。方法:以2019年1月到2019年10月期间在重庆医科大学附属儿童医院就诊的2例来自不相关家庭的先天性角化不良患者为研究对象。总结并分析2例DC患者的临床资料;通过全外显子测序及Sanger测序分析基因突变位点,并利用Swiss-PdbViewer预测蛋白结构的变化以分析突变位点的致病性;采用QPCR法测定相对端粒长度;运用流式细胞术综合分析淋巴细胞亚群及CD57表达情况。结果:两例患者均表现出典型的DC特征,无严重感染。此外,患者1(P1)由于小脑发育不全被诊断为Hoyeraal-Hreidarsson综合征。基因测序显示P1的PARN基因发生复合杂合突变(c.204G>T和c.178-245del),P2则在DKC1基因发生半合突变(c.1051A>G)。淋巴细胞亚群分析显示两例患者均有B和NK细胞减少,CD4:CD8比值倒置,初始CD4和CD8细胞的减少,CD21lowB细胞显著增多。另外,两例患者都有不同程度的辅助性T细胞(Th)、调节性T细胞(Treg)、滤泡调节性T细胞(Tfr)和滤泡辅助性T细胞(Tfh)数量异常。在两例患者中均发现端粒长度较短、CD57表达增加、CD8效应记忆T细胞以及CD45RA(TEMRA)表达增加。结论:在进展为严重疾病之前,DC患者在儿童时期会出现独特的免疫异常,CD8 T细胞衰老和端粒缩短可能是其标志。第二部分:WASp通过CD19及ITIM途径促进BCR-FCyRⅡB-pSHIP介导的B细胞负调控机制研究背景:Wiskott-Aldrich 综合征(WAS,Wiskott-Aldrich syndrome),即湿疹、血小板减少伴免疫缺陷综合征。除典型的临床表现外,现研究发现WAS病人高发自身免疫性疾病(42%-70%),而具体发生机制尚不清楚。近期研究阐明BCR-FcγRⅡB通路通过负调控B细胞信号活化而保持免疫平衡,我们的前期研究发现WASp缺陷引起BCR-FcγRⅡB-pSHIP介导的B细胞信号的负调控受损,其受损程度高于活化信号,使机体处于一个相对强活化的状态而导致自身免疫。目的:本研究拟以WAS病人及WAS-ko小鼠为研究对象,进一步探究WASp缺陷导致这一负调控受损的机制,为WAS患者自身免疫精准干预治疗提供靶点。方法:运用流式细胞术、TIRF(全内反射荧光显微镜)及Western-blot分析BCR-FcγRⅡB-pSHIP介导的B细胞信号通路中SHIP上游分子的表达情况。结果:我们发现与对照组相比,WASp缺陷使与SHIP在ITIM募集、活化直接相关的分子Lyn的磷酸化受损。再者,缺陷虽然不影响静息状态下FcγRⅡB的表达,但影响了 FcγRⅡB的磷酸化。另外,我们还发现CD19作为BCR重要的共受体,参与募集Lyn、Fyn等信号分子,其磷酸化在WASp的缺陷的情况下也是下降的。结论:结果表明WASp的缺陷影响了 CD19、CD32b及Lyn的活化而引起了 BCR-FcγRⅡB-pSHIP介导的B细胞信号的负调控受损,即WASp 通过 CD19 及 ITIM 途径促进了 BCR-FCγRⅡB-pSHIP 介导的 B细胞负调控。