毛细管电泳激光诱导荧光检测法分析拟南芥中的茉莉酸

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茉莉酸是一种由亚麻酸衍生的,具有环戊酮结构的植物激素,广泛存在于各种植物中。人们对茉莉酸的生物合成和分子代谢做了详细的研究,发现茉莉酸参与许多基因的表达调控。茉莉酸在植物生长调节中的作用分为两个方面:一部分与植物发育有关,如:种子和花粉萌发、细胞生长、细胞增殖、衰老组织脱落和块茎形成;另一部分与植物的胁迫耐受有关,如:机械损伤、病原菌感染、昆虫啃食、微生物侵害和干旱。虽然茉莉酸在植物生长发育中具有非常重要的调节作用,但是其在植物组织中的含量却比其它的植物激素低许多,不利于分离检测,不利于对茉莉酸的深入研究。为了研究茉莉酸的生理学功能,我们需要一种高灵敏度高选择性的检测方法对植物中的茉莉酸进行分析。目前为止,已经报道了多种检测茉莉酸的方法。比较常用的方法有:质谱分析法(MS)、气-液相色谱法-质谱分析法(GC–MS)、酶联免疫吸附法(ELISA)、高效液相色谱法(HPLC)、放射免疫检测法(RIA),这些检测方法的检测限比较高,但是都有一些难以克服的不足之处。MS和GC-MS需要在高温条件下对检测茉莉酸进行分析,使样品发生分解,部分茉莉酸被破坏影响检测结果的准确性,也就不能满足对茉莉酸进行痕量分析的要求。基于特定抗体的RIA和ELISA对茉莉酸进行检测时,与结构相似化合物的交叉反应对检测结果具有很大的影响。高效液相色谱法(HPLC)和荧光检测(LIF)联用也能对茉莉酸进行检测,但是这种方法需要通过复杂的分离提纯操作将茉莉酸与植物样品中的大量其它荧光化合物分离开来。毛细管电泳(CE)是一种发展迅速的分离检测方法,它能够与多种的检测方法连接使用,如:毛细管电泳紫外可见检测(CE-UV)和高效毛细管电泳激光诱导荧光检测(CE-LIF),具有简便、快速、灵敏的优点。毛细管电泳由于对植物大分子分析的小剂量、高灵敏、高效率以及低耗时的特点,在生物科学研究中获得了广泛的应用。毛细管电泳紫外可见检测法对茉莉酸进行分析的灵敏度不如高效毛细管电泳激光诱导荧光检测法的理想。毛细管电泳激光诱导荧光检测(LIF)具有最高的灵敏度。目前,高效毛细管电泳激光诱导荧光检测法已经广泛用于生物和临床分析,这种高灵敏度的分析方法还没有用于对茉莉酸的检测分析。本论文的主要研究内容是建立一种以毛细管电泳激光诱导荧光检测(CE-LIF)为基础,以8-氨基芘-1,3,6-三磺酸三钠盐(APTS)为衍生试剂的新方法,对拟南芥叶片中的茉莉酸分离检测。
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