四个STR基因座荧光标记复合扩增的研究及其法医学应用

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目的本课题旨在建立已有群体遗传学数据的STR基因座D11S4951、D7S3062、GATA168F06和D10S1426基因座的荧光标记复合扩增体系。按照美国DNA分析方法技术工作组(The Technology Working Group on DNA Analysis Methods,TWGDAM)的指导方案进行法医学实用性研究。方法要首先对多个本实验室做过群体遗传学研究的STR基因座进行筛选,从中获得四个多态性好、个人识别机率高,扩增产物长度片段有区别的四个STR基因座,即D11S4951、D7S3062、GATA168F06、D10S1426,利用传统的复合扩增方法,ABI-310毛细管电泳仪进行荧光标记复合扩增的研究。并对复合扩增体系的灵敏度和准确度,不同扩增循环次数和热启动下复合扩增的效果等进行了研究。按照TWGDAM指导方案的基本要求,对该体系进行了法医学实用性研究,包括基因座的种属特异性,组织同一性及可重复性。结果成功建立了D11S4951、D7S3062、GATA168F06和D10S1426的荧光标记复合扩增体系。而且,这一扩增体系条件易于优化,采用国产Taq酶,不需要热启动进行扩增,即可得到满意的扩增产物和分型结果。相对于国外昂贵的试剂盒,是一种成本低廉但效率高的STR基因座复合扩增体系。法医学应用性研究表明,该体系的检测灵敏度为0.25ng模板DNA,四个STR基因座具有较高的种属特异性,对同一个体的不同组织检测结果一致,对常见基质上的检材及混合样本具有检测能力。对15个实际检案样本的检测证明,该体系能用于法医学个人识别和亲权鉴定。结论D11S4951、D7S3062、GATA168F06和D10S1426的荧光标记复合扩增体系可应用ABI-310检测平台,获得可靠的分型结果。法医学应用性研究证明,该体系扩增条件易于优化、成本低廉、分型结果稳定,灵敏度和准确度高,种属特异性好,重复性好,对陈旧斑痕具有检测能力,能够对常见基质上的斑痕以及混合斑痕正确分型,与常见的动物及微生物无交叉反应,可以应用于法医学实际检案。
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