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由鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)和滑液支原体(Mycoplasma synovia,MS)感染引起的鸡毒支原体病(Mycoplasma gallisepticum disease)和滑液支原体病(Mycoplasma synovia disease)给养禽业带来了巨大的经济损失。目前主要通过免疫疫苗防控这两种疾病,但用单苗两次免疫不仅对鸡群应激大,影响生产效益,同时浪费时间和精力。因此,制备滑液支原体和鸡毒支原体二联灭活苗具有重要的实际意义。采用购自中国药监所的滑液支原体MS WVU1853株和鸡毒支原体MG Rlow株,通过优化条件,绘制MS在不同支原体基础培养基中的生长曲线,筛选出培养MS最适合的培养基培养MS,浓缩、灭活,制备MS菌体免疫原。SPF鸡免疫后血清中细胞因子IFN-γ从7日龄到28日龄IFN-γ分别为79 pg/mL、265 pg/m L、290 pg/m L、435pg/m L,均显著高于对照组(P<0.05)。流式细胞仪检测免疫组脾脏中的CD4+T细胞、CD8+T细胞的含量以及CD3+CD4+T细胞与CD3+CD8+T细胞的比值随着免疫的抗原量上升呈上升趋势,均高于对照组。免疫原体外刺激鸡树突状细胞及T淋巴细胞,5MOI MS刺激DC时MHC II类分子表达量最高,达74.4%;CD4+T淋巴细胞明显增殖,增殖比率达51.2%,CD8+T淋巴细胞增殖比率为36.2%。表明MS灭活免疫原能够显著引起CD4+T淋巴细胞增殖。用筛选出的最适培养培养基培养MS,浓缩、灭活,制备MS菌体抗原;结合实验室前期研究MG灭活疫苗的工作基础,优化MG的最佳培养条件,培养、浓缩、灭活,制备MG菌体抗原后,按抗原量1︰1混合MS及MG菌体抗原,两种灭活抗原混合后加入油佐剂乳化制成鸡毒支原体-滑液支原体二联灭活疫候选苗,对候选疫苗进行物理性状检验,无菌检验、疫苗安全性等实验。实验结果表明,候选支原体二联灭活疫苗可靠安全。选择不同剂量候选疫苗免疫SPF鸡,通过ELISA法检测针对MG和MS的抗体效价,结果显示,免疫组鸡的血清抗体水平显著高于对照组(P<0.05);免疫后4周攻毒,用国际标准毒株MG Rlow株(2×108 CFU/只)气囊内接种攻毒和MS WVU1853株(2×108 CFU/只)关节接种攻毒,于攻毒后2周分离关节液和气囊组织,通过荧光定量PCR法检测鸡关节及气囊中支原体的荷载量:MG拷贝数的对数值为1.06,对照组为3.33,差异显著(P<0.05)。MS拷贝数的对数值为0.76,对照组2.6,差异亦显著(P<0.05),表明二联苗对MG和MS均有良好的攻毒保护作用。一免后5周对鸡群加强免疫,监测免疫后鸡群20周内血清抗体效价的动态变化过程。结果表明持续6个月内,二联灭活疫苗能够诱导免疫鸡产生较高且持续的抗体应答。