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肾脏发育过程受到复杂的分子网络的调控,肾脏发育的研究有助于揭示先天性肾脏疾病的机制[1]。小鼠是应用最广泛的模式生物,而斑马鱼逐渐成为一种理想的肾脏发育研究模型[2、3]。近年来的研究发现了许多调控肾脏发育的重要转录因子和信号途径,然而还有许多问题尚未解决。
本实验室前期研究中鉴定了一个斑马鱼中胚层组织迁移缺陷的突变体mypt1(myosinphosphatasetargetingsubunit1)[4],脊椎动物的肾脏源自中胚层,我们推测该斑马鱼突变体中前肾发育异常很可能是前肾细胞迁移缺陷所致。为了研究该突变体表型,我们有必要构建特异标记前肾的转基因斑马鱼品系。ENPEP是一种小分子膜结合金属蛋白酶,对哺乳动物的血压调节和肾脏发育很重要,斑马鱼中enpep在前肾管中有表达,在肾小球中则不表达,构建肾管特异性表达基因enpep启动子驱动的荧光蛋白转基因斑马鱼,用于观察斑马鱼前肾管发育过程,为研究mypt1突变体的致缺陷的机制提供帮助。
在本实验中,我们分别利用Ac-Ds系统和Tol2系统各自构建了enpep基因启动子驱动的荧光蛋白的两种转基因品系Tg(enpep:eGPF)和Tg(enpep:dsRed),并且获得了能够稳定遗传的这两种转基因品系,根据荧光蛋白的表达情况,将转基因斑马鱼的荧光表达类型加以分型。这两种转基因斑马鱼品系将应用于研究斑马鱼肾脏发育机制。