川芎的抗氧化活性、色谱指纹图谱及质量控制方法研究

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川芎为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎,具有活血行气、祛风止痛之效,在中医临床应用与中药产业化中占有重要地位。但是《中华人民共和国药典》(2005年版一部)尚未建立有效成分、指标性成分鉴别方法或含量测定方法。目的:本论文以四川道地药材——川芎为研究对象,研究川芎HPLC指纹图谱与抗氧化活性的相关性,探索川芎的谱效关系,为川芎的抗氧化药效物质基础和质量控制新方法研究奠定基础;同时采用现代分析技术,研究与现代医药发展现状相符合的川芎质量标准,以期为《中国药典》(2010年版)中药川芎质量标准的制定提供科学依据。方法:1.采用DPPH法测定不同浓度的川芎提取液的清除率,计算不同产地川芎的抗氧化活性(IC50值)。2.在建立的川芎HPLC色谱指纹图谱基础上,采用灰色关联法和双变量相关分析法研究各色谱峰与抗氧化活性的相关性。3.采用全二维气相色谱-飞行时间质谱(GC×GC-TOFMS)研究不同产地川芎挥发油的差异性4.采用TLC和HPLC法,分别建立了川芎中欧当归内酯A的TLC鉴别和阿魏酸的含量测定方法;参照川芎药材的质量标准,研究川芎饮片质量控制方法。结果:1.在同一浓度下不同产地的川芎药材抗氧化活性存在差异,主要是高浓度下,川芎抗氧化活性差异小;低浓度下,抗氧化活性差异较大。但是不同产地的川芎抗氧化活性(IC50值)没有显著性差异。2.检测了33批样品的指纹图谱,共标定22个共有峰。结果显示,川芎主产区的样品相似度较高(相关系数>0.960),攀枝花的川芎与主产区样品存在较大差异(相关系数=0.758)。而GC×GC-TOFMS的检测结果显示,川芎主产区样品也存在较大差异。3.从关联度结果发现,川芎HPLC指纹图谱的共有峰中,峰6(未知),峰8(阿魏酸),峰9(未知),峰12(未知),峰13(未知),峰15(阿魏酸松柏酯),峰16(未知),峰17(藁本内酯),峰21(欧当归内酯A)是影响抗氧化活性的主要因素。而从关联系数分析结果发现,川芎中各化合物的交互作用和除川芎共有峰外的其他物质也在影响川芎抗氧化活性。4.TLC鉴别项下,川芎中欧当归内酯A的分离良好、斑点清晰;含量测定中,阿魏酸在2.06gg/ml~82.40μg/ml范围内,线性关系良好(r=0.9998),回收率为102.5%,RSD为1.19%;结论:1.川芎的色谱指纹图谱、抗氧化活性及其相关性结果表明,单一的化学分析方法或生物效价法均不能有效地控制川芎质量,采用多种化学分析手段及现代药理学、分子生物学技术,建立体现整体观的川芎药效指纹图谱,可能是提高川芎质量控制水平的重要途径。2.本文进行了《中国药典》(2010年版)川芎药材的修订研究;参照川芎药材的质量标准,建立川芎饮片的质量控制方法,为全面提高川芎药材尤其是川芎饮片的质量标准奠定基础。
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