生长抑素类似物对肝癌细胞的抑制作用及对CDK5表达的影响

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目的:将不同浓度的生长抑素类似物(奥曲肽)作用于体外培养人肝癌细胞株HepG2,观察肝癌细胞的形态变化及肝癌细胞的生长情况,于不同时间点检测各组的OD值,观察肝癌细胞的增值情况,再用免疫细胞化学法检测周期素依赖性蛋白激酶5(CDK5)在肝癌细胞中的表达情况,探讨生长抑素及其类似物对人肝癌细胞的抑制作用及其对周期素依赖性蛋白激酶5的表达的影响。   方法:1、体外培养人肝癌细胞株(HepG2),待细胞长满70%~80%用胰酶消化制成单细胞悬液,按1:3比例传代。2、按奥曲肽的浓度实验分四组:A组空白对照组,实验组奥曲肽浓度分别为B组0.002mg/ml,C组0.006mg/ml,D组0.010mg/ml。3、药物作用48h后在倒置显微镜下观察不同浓度组肝癌细胞的形态变化及细胞的生长情况。4、MTT比色实验观察不同浓度的奥曲肽(Octreotide)随着作用时间的延长对肝癌细胞增殖的影响。5、细胞爬片,免疫细胞化学法检测CDK5的表达情况。   结果:1、倒置显微镜下见,实验组的癌细胞形态发生改变,较多的贴壁细胞由树枝状变为透亮的圆形,悬浮细胞比例较对照组明显增大。2、在同一作用时间点,随药物浓度的增大,OD值减小,同一药物浓度,随作用时间延长,OD值也呈梯度变化,逐渐减小。说明奥曲肽对HepG2细胞的生长增殖的抑制作用呈时间剂量依赖关系。两组间比较差异均有统计学意义。3、光镜下观察到CDK5阳性表达物呈棕黄色颗粒,细胞质和细胞核均弥漫分布,着色程度呈梯度变化,奥曲肽的药物浓度越大着色越浅,苏木素复染后胞核呈棕褐色浓染,细胞浆较浅。随药物浓度增大,胞核淡染的比例增大且着色逐渐变淡。   结论:奥曲肽对肝癌细胞的增殖有抑制作用,可下调肝癌细胞中CDK5的表达。
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