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目的:在前期药效学实验和临床研究证明通便玉蓉丸能有效治疗便秘的基础上,深入探讨便秘的中医病理机制及通便玉蓉丸的立法原则与配伍特点。同时,通过观察正常小鼠及便秘小鼠胃排空的情况,从而判断该药物对小鼠胃排空作用的影响;通过观察黑色碳末在正常小鼠及便秘小鼠小肠的推进距离,从而判断该药物对小鼠小肠运动的作用的影响;通过测量正常小鼠、便秘小鼠结肠段组织水分的含量,以反映该药物对小鼠肠道的水分含量的影响情况,从而判断该药物的主要作用部位;通过观察对便秘小鼠肠组织5-HT含量的变化,以反映该药物对神经递质的影响,从而从激素方面阐明该药对便秘的作用机制。
方法:
理论探讨:总结历代相关论述便秘的文献,结合现代医学的研究进展,探讨便秘的中医病因、病机、理法方药及通便玉蓉丸的立法原则与配伍特点。
实验研究:1.对正常小鼠排便的影响:将60只小鼠随机分为空白对照组、通便玉蓉丸低、中、高剂量组、麻仁润肠丸组、新斯的明组,每组10只。除空白对照组外,其余各组每天灌服对应药物,其中新斯的明组给予皮下注射,空白对照组每天给予生理盐水灌胃,末次给药30min后,各组小鼠均按0.01ml/g的剂量给予碳末混悬液,间隔20min,将小鼠脱颈椎处死,立即剖开腹腔分离肠系膜,称取胃全重,沿胃大弯剪开冲洗去除胃内容物,滤纸吸干,再次称取重量为胃净重,计算胃排空率;测量幽门至回肠部的长度及从幽门至墨汁前沿的距离,计算墨汁推进百分率;剪取1cm结肠,称取湿重,烘干称取干重,计算肠内水分含量。
2.对地芬诺酯便秘模型小鼠排便的影响:将小鼠70只随机分为空白对照组、模型组、通便玉蓉丸低、中、高剂量组、麻仁润肠丸组、新斯的明组,每组10只。除对照组外,其余各组灌服地芬诺酯混悬液,复制便秘模型成功后,对照组和模型组每天给予生理盐水灌胃,其余各组灌服相应药物,新斯的明组给予皮下注射。末次给药30min后,各组小鼠均按0.01ml/g的剂量给予碳末混悬液,再过后20min,小鼠脱颈椎处死,余同实验一。
3.对燥结失水便秘模型小鼠排便的影响:将小鼠70只随机分为空白对照组、模型组、通便玉蓉丸低、中、高剂量组、麻仁润肠丸组、新斯的明组,每组10只。除空白对照组外,其余各组均禁水不禁食,复制便秘模型成功后,对照组和模型组每天给予生理盐水灌胃,其余各组灌服相应药物,新斯的明组给予皮下注射。末次给药30min后,各组小鼠均按0.01ml/g的剂量给予碳末混悬液,再过后20min,小鼠脱颈椎处死,余同实验一。
4.对地芬诺酯便秘小鼠结肠内5-HT的影响:分组、造模、给药均同实验二,小鼠处死后,于结肠处取1cm的肠组织,立即液氮冻存。在-4℃条件下,离心(3500r/min)10min,取上清液于-20℃下保存。采用ELISA法测定。
结果:
理论研究:便秘病位在大肠,与肺、脾、胃、肝、肾密切相关,脾肾亏虚,气血不足,肠道失润,推动乏力,糟粕停聚为慢性便秘的主要病机,治当温补肾阳,软坚散结,滋阴润肠,运下通便
实验研究:1.对正常小鼠排便的影响:通便玉蓉丸低剂量组、通便玉蓉丸中剂量组、通便玉蓉丸高剂量组、麻仁润肠丸、新斯的明均能明显促进正常小鼠胃排空(P<0.01),通便玉蓉丸低剂量组、通便玉蓉丸中剂量组、通便玉蓉丸高剂量组 三者呈剂量依赖性(P<0.01);通便玉蓉丸中剂量组、通便玉蓉丸高剂量组促进胃排空的作用优于麻仁润肠丸与新斯的明(P<0.01);通便玉蓉丸低剂量组与新斯的明作用相当(P>0.05),差于麻仁丸(P<0.01)。
通便玉蓉丸低剂量组、通便玉蓉丸中剂量组、通便玉蓉丸高剂量组、新斯的明均能明显促进正常小鼠小肠推进(P<0.01),麻仁润肠丸无明显作用(P>0.05),通便玉蓉丸低剂量组、通便玉蓉丸中剂量组、通便玉蓉丸高剂量组 三者呈剂量依赖性(P<0.01);新斯的明与通便玉蓉丸中剂量组作用相当,差于通便玉蓉丸高剂量组,但优于通便玉蓉丸低剂量组。
通便玉蓉丸中剂量组、通便玉蓉丸高剂量组、麻仁润肠丸有明显增加正常小鼠大肠吸收水分的作用(P<0.01),通便玉蓉丸低剂量组有明显增加正常小鼠大肠吸收水分的作用(P<0.05);通便玉蓉丸中剂量组、通便玉蓉丸高剂量组作用优于麻仁润肠丸。
2.对地芬诺酯便秘模型小鼠排便的影响:通便玉蓉丸低剂量组、通便玉蓉丸中剂量组、通便玉蓉丸高剂量组、麻仁润肠丸组、新斯的明有明显促进便秘小鼠胃排空的作用(P<0.01);通便玉蓉丸中剂量组、通便玉蓉丸高剂量组作用优于麻仁润肠丸,通便玉蓉丸低剂量组与麻仁润肠丸作用相当;麻仁润肠丸作用优于新斯的明。
通便玉蓉丸低剂量组、通便玉蓉丸中剂量组、通便玉蓉丸高剂量组、新斯的明均能明显促进便秘小鼠小肠推进(P<0.01),麻仁润肠丸无明显作用(P>0.05);通便玉蓉丸低剂量组、通便玉蓉丸中剂量组、通便玉蓉丸高剂量组、新斯的明四者作用相当(P>0.05)。
通便玉蓉丸低剂量组、通便玉蓉丸中剂量组、通便玉蓉丸高剂量组麻仁润肠丸组、新斯的明组有明显增加便秘小鼠大肠吸收水分的作用(P<0.01);通便玉蓉丸中剂量组(P<0.05)、通便玉蓉丸高剂量组(P<0.01)作用优于麻仁润肠丸。
3.对燥结失水便秘模型小鼠排便的影响:通便玉蓉丸低剂量组、通便玉蓉丸中剂量组、通便玉蓉丸高剂量组、麻仁润肠丸组、新斯的明有明显促进便秘小鼠胃排空的作用(P<0.01);通便玉蓉丸中剂量组与麻仁润肠丸、新斯的明作用相当,差于通便玉蓉丸高剂量组,但优于通便玉蓉丸低剂量组;
通便玉蓉丸低剂量组、通便玉蓉丸中剂量组、通便玉蓉丸高剂量组、新斯的明均能明显促进便秘小鼠小肠推进(P<0.01),麻仁润肠丸能明显促进便秘小鼠小肠推进(P<0.05);新斯的明与通便玉蓉丸中剂量组作用相当,差于通便玉蓉丸高剂量组,但优于通便玉蓉丸低剂量组与麻仁润肠丸;通便玉蓉丸低剂量组作用优于麻仁润肠丸。
通便玉蓉丸低剂量组、通便玉蓉丸中剂量组、通便玉蓉丸高剂量组、新斯的明有明显增加便秘小鼠大肠吸收水分的作用(P<0.01);麻仁润肠丸有明显增加便秘小鼠大肠吸收水分的作用(P<0.05)、通便玉蓉丸高剂量组作用优于麻仁润肠丸和新斯的明。
4.对地芬诺酯便秘小鼠结肠内5-HT的影响:通便玉蓉丸低剂量组、通便玉蓉丸中剂量组、通便玉蓉丸高剂量组、麻仁润肠丸均能明显增加便秘小鼠结肠内5-HT含量(P<0.01),新斯的明能明显增加便秘小鼠结肠内5-HT含量(P<0.05);通便玉蓉丸低剂量组与麻仁润肠丸作用相当,差于通便玉蓉丸中剂量组、通便玉蓉丸高剂量组,优于新斯的明。
结论:通便玉蓉丸全方组方严谨,针对病机,寒热并用,补泻同施,兼顾标本,补脾益气而不滋腻,润肠通便而不峻猛,清热润燥而不寒凉,为治疗便秘的有效新制剂。该药可促进正常小鼠及便秘小鼠胃排空;可促进正常小鼠及便秘小鼠小肠运动,增加碳末推进率;可通过影响大肠吸收水分的作用而增加小鼠肠道中的水分,达到通便效果;可增加便秘小鼠组织中5-HT含量,这可能是通便玉蓉丸提高肠动力,改善便秘症状的机制。