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目的:研究不同浓度黄芪注射液(或)氟尿嘧啶(5-FU)单独/联合应用对结肠癌Lo Vo细胞生长的影响及其机制。方法:(1)采用MTT法测定结肠癌Lo Vo细胞的生长曲线;(2)采用MTT法测定结肠癌Lo Vo细胞在不同浓度的黄芪注射液、5-FU、黄芪注射液联合5-FU单独或共同干预下的生长抑制率;(3)采用流式细胞术检测黄芪注射液、5-FU、黄芪注射液联合5-FU作用于Lo Vo细胞的细胞周期变化;(4)实时定量PCR检测bcl-2、bax、P-gp(P-糖蛋白)的m RNA水平表达变化;(5)免疫细胞化学法检测bcl-2、bax及P-gp蛋白水平表达情况;采用Ki-67免疫细胞化学及免疫荧光法检测细胞的增殖活性。结果:(1)MTT细胞增殖活性检测结果显示黄芪注射液作用于结肠癌Lo Vo细胞,其浓度为0.25g/ml时对细胞有增殖作用,浓度为0.5-2g/ml时可明显抑制结肠癌Lo Vo细胞的生长,并且随着浓度的增大和作用时间的延长,对Lo Vo细胞生长抑制作用增强(P<0.05);不同浓度的5-FU可明显抑制结肠癌Lo Vo细胞的生长,并随着浓度的增大和作用时间的增长,抑制肿瘤生长效果增强(P<0.0);在用药不同时间点,黄芪注射液1g/ml与5-FU 10mg/l联合用药比单用黄芪注射液或单用5-FU抑制结肠癌Lo Vo细胞生长的作用更强(P<0.05)。(2)流式细胞术检测细胞周期结果显示黄芪注射液、5-FU作用于结肠癌Lo Vo细胞后,G0/G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,联合用药组这一变化趋势更显著(P<0.05)。(3)实时定量PCR检测bcl-2、bax、P-gp的m RNA水平表达,结果显示:黄芪注射液使结肠癌Lo Vo细胞中bax基因表达下调差异无统计学意义(P>0.05),bcl-2基因表达上调,P-gp基因表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);5-Fu使Lo Vo细胞中bcl-2、P-gp基因表达下调,bax基因表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);联合用药组较单用黄芪注射液或单用5-FU对bcl-2、P-gp基因表达下调,bax基因表达上调作用明显增强(P<0.05)。(4)免疫细胞化学法检测bcl-2、bax、P-gp、细胞增殖蛋白Ki-67的表达,结果显示空白对照组与黄芪注射液组对比bax、bcl-2蛋白的表达水平差异无统计学意义(P>0.05),P-gp、Ki-67蛋白的表达水平差异有统计学意义(P<0.05);空白对照组与5-FU组对比bax、bcl-2、P-gp、Ki-67蛋白的表达水平差异有统计学意义(P<0.05);5-FU组与联合用药组对比bcl-2蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),bax、P-gp、Ki-67蛋白表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)黄芪注射液浓度为1g/ml时,抑制结肠癌Lo Vo细胞增殖作用最强,浓度过高可能产生药物毒性,而在低浓度0.25g/ml时可促进肿瘤细胞增殖。(2)黄芪注射液浓度为0.5-2g/ml或5-FU单用可抑制结肠癌Lo Vo细胞的生长,且与时间、剂量呈正相关性;二者联合应用对结肠癌Lo Vo细胞的生长抑制明显优于单用黄芪注射液或5-FU,且在共同用药48小时后具有显著协同作用。(3)黄芪注射液联合5-FU抑制结肠癌生长的作用机制可能是:阻滞肿瘤细胞周期,抑制细胞增殖,下调bcl-2、P-gp,上调bax表达,诱导结肠癌细胞凋亡。