结合珠蛋白（haptoglobin,Hp）,又称触珠蛋白,主要由肝脏合成,在感染、损伤及炎症诱导的急性期反应（acute phase response,APR）中发挥重要作用。本研究从花鲈（Lateolabrax japonicus）肝组织转录组测序结果中获得Hp基因（Lj Hp）全长c DNA序列（Gen Bank No.MK820673）。Lj Hp由2285个核苷酸组成,包含1个大的（open reading frame,ORF）,预测编码1个由309个氨基酸组成、分子量约为33.82 k Da的前体蛋白,N端22个氨基酸残基为信号肽。序列分析显示,Lj Hp具有鱼类Hp的典型特征,与欧洲海鲈（Dicentrarchus labrax）Hp氨基酸序列同源性最高,为76.8%,其次是黄鳝Hp,同源性为75.7%;系统进化树分析表明,鱼类Hp形成1个大簇,Lj Hp与黄鳝（Monopterus albus）、大黄鱼（Larimichthys crocea）、斑马宫丽鱼（Maylandia zebra）、高体鰤（Seriola dumerili）、金头鲷（Sparus aurata）和欧洲海鲈（Dicentrarchus labrax）的Hp形成一个小簇,与欧洲海鲈和黄鳝的进化相关性最高。Lj Hp m RNA主要在健康花鲈肝脏中表达,在哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）感染后,其在花鲈肝脏、脾脏和头肾中表达量显著增加（P<0.05）。成功原核表达了Lj Hp基因成熟肽,并制备了抗血清。Western blot分析表明,Lj Hp天然蛋白在花鲈肝脏和血清中存在N-糖基化修饰,并且在哈维氏弧菌感染后血清中Lj Hp的含量显著上调（P<0.05）。以上结果显示,Lj Hp m RNA及其蛋白的表达与哈维氏弧菌感染密切相关,揭示其可能作为一个正急性期蛋白（positive acute phase protein,PAPP）参与花鲈抵抗细菌感染。进一步通过镍柱纯化及尿素梯度复性获得纯度较高的Lj Hp重组蛋白（recombinant Lj Hp protein,r Lj Hp）,在此基础上建立了用于测定花鲈血清Hp含量的酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）。结果表明,直接包被法比双抗体夹心法具有更高的线性相关性,Lj Hp抗血清的最佳稀释倍数为1:80000,最佳包被时间为12 h,一抗和二抗最佳反应时间分别为2 h和1 h,显色时间为15 min。该方法定性检测的灵敏度为32 ng/m L,标准曲线的线性回归方程为y=0.001x+0.0179（R~2=0.9909）,其中x和y分别代表r Lj Hp浓度和OD450值;应用该方法测定了哈维氏弧菌感染不同时间段花鲈血清中的Hp含量,结果表明,感染6 h时开始血清中Lj Hp含量即显著高于对照组,12 h时达到峰值,此后逐渐降低,但96 h时仍显著高于对照组。本研究结果不仅为进一步研究鱼类Hp的功能及其在病原菌感染引起的APR中的分子机制提供基础,也为评估鱼类受感染程度提供分子标记物及技术支持。