第一部分huMSCs/HA-GEL复合物的构建【目的】获取高纯度、状态佳的huMSCs,并评估HA-GEL对huMSCs的安全性,构建huMSCs/HA-GEL复合物。【方法】利用组织贴壁法提取和纯化huMSCs,传代并冻存,获得P3-P6代细胞,根据huMSCs表面特异性分子用流式细胞术分选鉴定所获得的P3-P6代的huMSCs,利用体外分化潜能诱导实验验证所获得huMSCs的分化潜能;利用流式细胞术和DEADLIVE试剂盒检测法检测huMSCs与HA-GEL共培养后细胞凋亡率和死活细胞比例。【结果】成功获得增殖能力强、高度纯化、具有良好体外分化潜能的P3-P6代huMSCs;成功构建huMSCs/HA-GEL复合物。【结论】huMSCs可通过组织贴壁法获得,HA-GEL作为载体对huMSCs的细胞状态无影响。第二部分huMSCs/HA-GEL复合物促进恒河猴宫腔粘连修复的效果观察【目的】建立非人灵长类动物的宫腔粘连模型以及huMSCs/HA-GEL复合物移植术,明确huMSCs/HA-GEL复合物对恒河猴宫腔粘连的治疗效果。【方法】利用机械刮宫法建立非人灵长类动物的宫腔粘连模型,建模后对恒河猴实行huMSCs/HA-GEL复合物移植术,移植术后密切监测宫腔内生理情况、评估子宫内膜病理学特征改变。【结果】成功建立恒河猴宫腔粘连模型,huMSCs/HA-GEL复合物移植术后恒河猴恢复月经周期,宫腔形态恢复,粘连状况改善,子宫内膜胶原纤维面积明显降低,较少炎症细胞浸润,出现典型分泌期绒毛结构。【结论】huMSCs/HA-GEL复合物对子宫内膜损伤以及粘连具有高效修复作用。第三部分huMSCs/HA-GEL复合物促进恒河猴宫腔粘连修复的机制研究【目的】初步探讨huMSCs/HA-GEL促进恒河猴宫腔粘连修复的可能机制。【方法】首先,分别针对人类和恒河猴DXZ1及SRY基因的非同源序列设计引物,并进行非同源性验证;采用FISH探针（Vysis SRY Probe LSI SRY Spectrum Orange/Vysis CEP X Spectrum Green）对多点取样的恒河猴子宫内膜组织进行人类移植物huMSCs所携带的DXZ1及SRY基因的示踪,利用免疫荧光法和RT-qPCR法检测子宫内膜所处微环境中相关细胞因子的变化。【结果】SRY和DXZ1引物特异且稳定,产物单一,且与恒河猴来源的组织DNA无同源性,设计的引物均可用于本课题后续对huMSCs的示踪检测;通过FISH法定位显示,移植后两个月的恒河猴子宫内膜组织中无huMSCs定植,同时,通过对子宫内膜所处微环境中的细胞因子进行检测,huMSCs/HA-GEL移植后子宫内膜中炎症因子表达量降低,促内膜再生的相关细胞生长因子表达水平升高。【结论】移植术后两个月huMSCs未在子宫内膜组织中有稳定植入。huMSCs可能通过分泌一系列旁分泌因子如抗炎因子、生长因子和细胞因子,这些细胞因子共同构建了具有抗炎、促修复、维持细胞功能和血管生成的微环境条件,从而发挥修复内膜损伤的作用。