目的:在精准医学的大力推动下,液体活检逐渐应用于临床。液体活检是一种能够动态反映肿瘤发生发展的分子检测方法,微创、易取材、实时监测等优点促使其在肺癌临床研究与实践中快速发展。液体活检在实际的临床诊断应用过程中的准确性有待进一步验证。本研究通过比较肺癌患者与肺良性结节患者外周血循环肿瘤细胞(Circulating tumor cells,CTCs)水平探究循环肿瘤细胞检测在肺部肿瘤诊断中的应用。方法:选取2016年3月到2018年2月在四川省科学院·四川省人民医院经CT显示为肺部占位病变患者159例及6例健康对照作为研究对象,其中159例肺部占位性病变患者中117例为肺癌患者,42例为肺部良性结节患者,肺部良性结节患者包含29例肺炎性结节和13例肺部良性肿瘤。以叶酸受体为靶点检测所有样本的外周血CTCs。对CTCs水平进行统计并绘制受试者工作特征性曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC)评估CTCs检测对于肺部结节性质检测的敏感性、特异性;用曲线下面积(Area under curve,AUC)来对比CTCs水平及神经元特异性烯醇化酶(Neuron specific enolase,NSE)、癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)、细胞角蛋白片段19(Cytokeratin 19 fragment,cyfra2l-1)、鳞状上皮细胞癌相关抗原(Squamous cell carcinoma antigen,SCC)四类肿瘤标志物对于肺部占位病变鉴别的准确性。结果:不同病理分期与不同肿瘤直径大小的肺癌患者CTCs水平有统计学差异(P<0.05);发生转移的肺癌患者CTCs的值明显高于未转移的患者(P=0.003)。不同年龄、性别、病理分化程度与病理类型的肺癌患者CTCs水平无统计学差异(P>0.05)。肺癌患者与健康人CTCs水平有统计学差异(P=0.015),与肺部良性结节患者CTCs水平无统计学差异(P=0.763)。ROC曲线分析结果显示肺癌与肺部良性结节患者的CTCs水平的AUC值为0.540,约登指数为0.193,敏感性81.2%,特异性39.1%;肺癌与肺炎性结节患者的CTCs水平的AUC值为0.486,约登指数为0.098,敏感性为65.0%,特异性为44.8%;肺癌与肺部良性肿瘤CTCs水平的AUC值为0.662,约登指数为0.436,敏感性为74.4%,特异性为59.2%;肺癌患者与健康人CTCs水平的AUC值为0.793,约登指数为0.628,敏感性为79.5%,特异性为83.3%。对CTCs水平与其他肿瘤标志物(CEA、NSE、cyfra21-1、SCC)的ROC曲线分析结果中AUC值分别为0.540,0.524,0.411,0.517,0.542。结论:本研究结果显示外周血CTCs水平与肿瘤的分期,肿瘤直径的大小和转移相关,可用于跟踪肺癌的病情发展。外周血CTCs水平的检测对肺部结节的鉴别准确性较差,其中包含CTCs水平的检测对肺癌与肺炎性结节鉴别准确性差,而对肺癌与肺良性肿瘤和健康人的鉴别准确性较好。目的:DNA甲基化是真核生物基因组DNA的一种重要的表观遗传学修饰,在维持高等生物正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育、衰老以及人类肿瘤的发生等生物学过程中起着重要作用。本研究检测早期肺癌患者血浆循环游离DNA(Circulating free DNA,cf DNA)甲基化修饰改变,探究血浆cf DNA甲基化对肺癌的早期筛查的应用。方法:选取早期肺腺癌患者与健康人各3例,收集肺癌患者术前外周血血浆及对应的石蜡组织与健康人血浆。应用甲基化修饰依赖性内切酶测序法(Methylation-dependent restriction-site associated DNA sequencing,Methyl RAD)检测三个早期肺癌患者石蜡组织DNA及其对应的血浆cf DNA、三个正常人的血浆cf DNA的DNA甲基化修饰变化。结果:Methy RAD检测出早期肺癌患者的血浆cf DNA的总体甲基化水平明显低于石蜡组织DNA,而与正常人血浆cf DNA的差别不明显。肺癌患者血浆cf DNA中检出31363个甲基化位点,与石蜡组织DNA相同,而与正常人血浆cf DNA不同。聚类分析显示患者与正常人血浆cf DNA总甲基化水平组内无差异,而组间有明显差异。KEGG富集分析发现差异位点富集程度最高的20条信号通路中包含了非小细胞肺癌相关的代谢通路,该通路中有35个差异甲基化位点。除已报道的血浆ct DNA甲基化位点FHIT、CDKN2A、RASSF1、TP53、RARB外,还发现RASSF5、ERBB2、ALK和CCND1等可作为肺癌诊断筛查的潜在位点。结论:利用Methyl RAD方法在血浆cf DNA基因组中检测到的肺癌相关特异甲基化位点可以作为肺癌的早期筛查候选标记物,为早期肺癌无创液体活检奠定基础。