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目的研究抑制组蛋白去乙酰化酶11(histone deacetylases11, HDAC11 )活性诱导大鼠肝移植免疫耐受的机制以及比较使用HDAC11-shRNA诱导免疫耐受与术后使用免疫抑制剂的优越性。方法(1)改良Kamada“二袖套法”建立(Lewis-BN)大鼠同位肝移植(orthotopic liver transplantation, OLT)急性排斥动物模型。将受体BN大鼠随机分为对照组,干预组和转染组。转染组以0.1 ml/min的流速于肝移植冷保存期经门静脉持续灌注HDAC11-shRNA 20 min;对照组以同样速度同样时间经门静脉注入等量生理盐水;干预组术后1～7天以1 mg/kg肌肉注射免疫抑制剂他克莫司(FK506)。观察术后7天内大鼠生存率,并于术后第7天活杀受体大鼠取门静脉血和下腔静脉血及左肝外叶组织标本。HE染色后光镜下观察肝脏组织病理学改变。全自动生化分析仪检测下腔静脉血中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)和总胆红素(total bilirubin, TBIL)含量。实时荧光定量PCR及蛋白免疫印记法测定肝组织HDAC11和IL-10 mRNA及蛋白表达水平。酶联免疫吸附法检测血清IL-2、IFN-γ和IL-10的含量。HDAC11在各组间表达情况的比较采用均数±标准差(±sd)表示,用SPSS 13.0软件进行方差分析,量的统计学方法采用t检验,率的统计采用χ2检验,P<0.05表示差异有统计学意义。结果(1)应用改良Kamad“a二袖套法”成功地建立了(Lewis-BN)大鼠原位肝移植排斥动物模型。(1)对照组、干预组和转染组7天内生存率分别为30%、70%和90%,转染组明显高于干预组和对照组(P<0.05),干预组高于对照组(P<0.05)。(2)根据RAI评分标准,术后第7天对照组、干预组和耐受组病理改变分别为重度急性排斥反应、不确定的急性排斥反应和无急性排斥反应。(3)对照组、干预组和转染组血清ALT含量分别为963.43±64.21U/L、634.73±43.28U/L和198.23±13.82;AST分别为742.46±52.71U/L、438.36±45.34U/L和115.79±21.23U/L; TBIL分别为94.64±14.35μmol/L、55.42±15.45μmol/L和15.34±0.56μmol/L;干预组血浆ALT、AST以及TBIL水平较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05);而转染组含量更低,明显低于对照组和干预组(P<0.05)。(4)Real-Time PCR和Western blot检测HDAC11和IL-10 mRNA在肝组织中表达水平,结果显示:对照组、干预组和转染组HDAC11和IL-10 mRNA相对表达量分别为0.91±0.22、0.52±0.13、0.24±0.06和0.29±0.04、0.58±0.17、1.17±0.36。蛋白表达量分别为1.73±0.21、0.75±0.12、0.42±0.06和0.49±0.04、1.02±0.16、2.45±0.28。干预组HDAC11表达量低于对照组(P<0.05);转染组HDAC11表达量明显低于干预组和对照组(P<0.05)。而IL-10则在转染组表达最多,明显高于干预组和对照组(P<0.05),干预组高于对照组(P<0.05)。ELISA结果表明:对照组、干预组和转染组IL-2和IFN-γ表达量分别为154.67±14.66、62.83±9.58、28.49±3.97和93.78±11.62、54.23±8.58、20.65±3.45。IL-10表达量分别为12.33±1.58、34.48±4.10和67.50±9.39。干预组IL-2和IFN-γ含量低于对照组(P<0.05),而转染组更低,和对照组和干预组比较有统计学差异(P<0.05)。相反,耐受组IL-10含量明显高于干预组和对照组(P<0.05),干预组高于对照组(P<0.05)。结论(1)抑制大鼠移植肝脏HDAC11的活性可使IL-10表达增加。(2)HDAC11对IL-10的负性调控作用有助于免疫耐受的诱导与维持。(3)使用HDAC11-shRNA诱导肝移植免疫耐受优于使用免疫抑制剂FK506。