论文部分内容阅读
目的:初步研究RecQ家族DNA解旋酶(RecQ1,BLM,WRN,RecQ4)在新生期小鼠、生长期小鼠、成熟期小鼠和衰老期小鼠重要器官中的表达水平与衰老的相关性。方法:通过连续49天注射D-gal的方法建立衰老小鼠模型,观察并记录小鼠的生存状态,每隔7日记录一次小鼠的体重,造模时间结束后,计算小鼠肝脏、脾脏的脏器指数,用H-E染色法观察小鼠胸腺和脾脏的组织学的改变,用Western blot法检测小鼠肝脏中衰老相关蛋白P16的表达水平,分别用黄嘌呤氧化酶法和TBA法检测小鼠血清中SOD活力和MDA含量,进行衰老小鼠模型的生物学鉴定。分别用Western blot和IHC-P检测小鼠四个发育阶段(新生期、生长期、成熟期、衰老期)肝脏、脾脏和骨髓中RecQ家族解旋酶(RecQ1,BLM,WRN,RecQ4)的表达水平(新生期小鼠没有检测骨髓)。结果:1.D-gal衰老模型组小鼠生存状态变差,体重增长低于对照组小鼠,衰老模型组小鼠肝脏和脾脏的脏器指数减小、血清中SOD活性由(180.7±2.93)U/ml下降到(105.3±4.8)U/ml(P<0.01)、MDA含量由(4.03±0.74)nmol/ml上升至(13.3±0.31)nmol/ml(P<0.01)、肝脏P16蛋白表达水平增高,以上各组数据与对照组小鼠相比差异有统计学意义(P<0.05)。脾脏H-E染色切片显示:衰老组小鼠脾脏边缘区模糊、白髓与红髓界限模糊;胸腺H-E染色切片显示:衰老组小鼠胸腺皮质、髓质界限模糊,胸腺细胞分布稀疏。上述结果表明,衰老小鼠模型构建成功。2.新生期、生长期、成熟期和衰老期小鼠肝脏RecQ1免疫组织化学染色切片平均光密度值分别为:(0.148±0.036)、(0.105±0.004)与新生期小鼠相比(P<0.05)、(0.094±0.004)与新生期小鼠相比(P<0.01)、(0.073±0.008)与新生期小鼠相比(P<0.01),RecQ1蛋白在新生期小鼠、生长期小鼠、成熟期小鼠和衰老期小鼠肝脏中的表达水平呈逐渐减少的趋势。RecQ1蛋白在四个发育阶段小鼠脾脏中均有阳性表达且表达水平相近,免疫组织化学染色切片平均光密度值分别为(0.130±0.004)、(0.109±0.017)与新生期小鼠相比(P<0.05)、(0.112±0.001)与新生期小鼠相比(P<0.05)、(0.102±0.021)与新生期小鼠相比(P<0.05)。RecQ1蛋白在生长期小鼠和成熟期小鼠的骨髓中有较高的表达水平,在衰老期小鼠骨髓中表达水平略有降低,免疫组织化学染色切片平均光密度值分别为(0.127±0.027)、(0.130+0.012)、(0.122±0.001);3.新生期、生长期、成熟期和衰老期小鼠肝脏BLM免疫组织化学染色切片平均光密度值分别为:(0.142±0.020)、(0.106±0.011)与新生期小鼠相比(P<0.05)、(0.073±0.005)与新生期小鼠相比(P<0.01)、(0.019±0.0001)与新生期小鼠相比(P<0.01)。四个发育阶段小鼠脾脏BLM免疫组织化学染色切片平均光密度值分别为:(0.123±0.015)、(0.087±0.008)与新生期小鼠相比(P<0.01)、(0.028±0.001)与新生期小鼠相比(P<0.01)、(0.016±0.001)与新生期小鼠相比(P<0.01)。生长期、成熟期和衰老期小鼠骨髓BLM免疫组织化学染色切片平均光密度值分别为:(0.117±0.003)、(0.059±0.001)与生长期小鼠相比(P<0.01)、(0.014±0.001)与生长期小鼠相比(P<0.01)。BLM蛋白在小鼠肝脏、脾脏和骨髓的表达水平与小鼠的年龄增长均呈负相关趋势;4.WRN蛋白在四个发育阶段小鼠肝脏、脾脏中的表达水平如下:新生期小鼠与生长期小鼠表达水平相近,成熟期小鼠略低(与新生期小鼠相比,P<0.05),衰老期小鼠WRN蛋白的表达水平锐减(与新生期小鼠相比,P<0.01),WRN蛋白在生长期小鼠骨髓中的表达水平较高,成熟期次之,衰老期明显降低(与生长期小鼠相比,P<0.01);5.RecQ4蛋白在四个发育阶段小鼠肝脏中的表达水平呈逐渐下降的趋势,在脾脏中,衰老期小鼠RecQ4蛋白表达水平锐减(与新生期小鼠相比,P<0.01),骨髓RecQ4蛋白表达在生长期小鼠中最高,衰老期小鼠明显下降(与生长期小鼠相比,P<0.01)。结论:RecQ家族解DNA旋酶在小鼠重要器官中的表达水平,随着小鼠年龄的增长总体呈下降趋势,RecQ家族DNA解旋酶的表达水平可能与衰老的发展相关,RecQ家族DNA解旋酶有望成为研究衰老相关疾病的新靶点。