成纤维细胞生长因子8a (fibroblast growth factor 8,FGF8)作为成纤维细胞生长因子家族(fibroblast growth factor family,FGFs家族)的第8个成员的a亚型,它具有一般家族成员的作用：促进软骨形成、活化上皮细胞、促进伤口愈合等,同该家族的其他成员相比,FGF8a有望成为既刺激正常细胞分化,又无诱导癌变之虞的新一代细胞生长因子。FGF8a用药的有效性和安全性成为全球研究的焦点。本研究首先在摇瓶实验中摸索发酵基本条件,从培养基pH值、诱导时机、IPTG诱导终浓度和诱导温度四个影响因素做“四因素四水平”正交实验设计,找出最适发酵工艺参数。然后根据摇瓶实验结果和以往经验控制发酵参数,进行发酵罐发酵。发酵结束后离心收菌,进行SDS-PAGE分析目的蛋白含量。纯化过程中对前期的方法进行优化,简化蛋白复性操作。然后采用MTT法检测rhFGF8a蛋白活性,计算出蛋白生物学活性。在药效学方面,首先进行鸡胚尿囊膜(CAM)实验,观察rhFGF8a在诱发CAM血管生成的能力；然后研究rhFGF8a与间隙连接蛋白抑癌基因Cx43的关系,通过western blotting印迹分析观察rhFGF8a能否独立上调Hela细胞Cx43蛋白的表达。研究表明,摇瓶正交实验得出最优参数组合为培养基pH值7.0,IPTG诱导时机OD600值为0.5, IPTG终浓度为0.5mM、诱导温度30℃。在发酵过程中,参数控制为：(1)空气流量初始设定为10L/min,诱导后升为15L/min,溶氧控制在40%；(2)温度初始为37℃,诱导时降到30℃；(3)pH值设定为7.0；(4)搅拌速度：设定搅拌速度下限为105rpm,上限为500 rpm；(5)补料：在发酵培养基中培养3h后开始匀速补料250ml/h。发酵结束收获菌体20g/L,经SDS-PAGE电泳分析目的蛋白rhFGF8a表达量占菌体总蛋白的30%左右。优化蛋白纯化条件,蛋白复性所需的氧化型谷胱甘肽与还原型谷胱甘肽用量减少至原来的1/10,尿素浓度从4M梯度开始,降低了成本,rhFGF8a纯化过程蛋白收率为57%。MTT法检测结果表明发酵纯化后收集的蛋白对成纤维3T3细胞有一定的促增长作用,生物学活性为22000IU/mg。药效学方面,CAM实验表明,rhFGF8a较bFGF在诱发CAM血管生成能力上相对较弱；Western blotting印迹表明rhFGF8a能独立上调Hela细胞抑癌基因Cx43的表达。