论文部分内容阅读
背景:结肠癌是目前世界上常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率都位居恶性肿瘤前列。结肠癌的确切发病机制尚未完全阐明。应用蛋白质组学技术研究结肠癌的发生及发展过程,阐明其蛋白质种类及表达情况,可能会识别癌变相关的蛋白质,探讨其癌变的发病机制,为鉴定结肠癌癌变相关蛋白鉴定基础,尤其是寻找阻断癌变的靶蛋白,对于提高结肠癌的早期诊断和疗效,改善预后具有重要意义。方法:首先采用激光捕获显微切割(laser capture microdissection, LCM)技术纯化正常结肠组织和结肠癌组织,然后用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术结合二维液相色谱串联质谱(2DLC-MS/MS)技术分离和鉴定人癌旁正常结肠组织与人结肠癌组织的差异表达蛋白质。采用KEGG通路分析差异蛋白质参与的信号通路以及生物学过程,采用(protein-protein interaction, PPI)分析差异蛋白质的相互作用网络。Western Blot和免疫组织化学染色方法验证差异蛋白质HSPD1、DCN和S100A9在结肠癌与正常结肠组织中的表达水平。结果:(1)建立了结肠癌和正常结肠的差异蛋白表达谱,识别并鉴定188个差异表达的蛋白质点,其中在结肠癌上调的蛋白77个,下调的蛋白111个。(2)KEGG通路分析显示:这些蛋白质涉及与肿瘤相关的一些生物学过程,如TGF-beta信号通路、细胞生长与死亡、信号传导、细胞周期以及凋亡等。(3)PPI分析结果显示:差异蛋白形成相互作用网络图,其中HSPD1居于网络的重要节点,并与DCN、S100A9等蛋白相互作用。(4) Western Blot结果验证HSPD1和S100A9在结肠癌中表达上调,DCN在结肠癌表达水平下调;免疫组织化学染色验证HSPD1和S100A9在结肠癌中表达上调,DCN在结肠癌表达水平下调。结论:本次研究采用的是基于激光捕获显微切割的蛋白质组学技术筛选并鉴定了结肠癌组织与正常结肠组织共188个差异表达的蛋白,其中在结肠癌中上调的77个,下调的111个。其中,HSPD1、 DCN以及S100A9在KEGG通路分析和PPI蛋白质相互作用分析中参与与癌症相关的生物学作用,为进一步研究结肠癌发病的分子机制提供实验依据。