鸡贫血病毒(chicken anemia virus,CAV)就是一种诱导细胞凋亡的新病毒,它可编码3种蛋白:VP1、VP2及VP3。而VP3(Apoptin,亦称凋亡素)是功能蛋白,仅诱导具有致瘤表型细胞或转化表型细胞的凋亡,而对正常二倍体细胞无杀伤作用,因此VP3是一种极有应用前景的抗肿瘤生物制剂。但其肿瘤细胞特异性凋亡诱导机制目前并不清楚。已有的研究表明VP3蛋白在细胞中的定位可能与其凋亡效应密切相关。蛋白质转导结构域(protein transduction domain,PTD)最早发现于HIV的TAT蛋白,大量的研究表明PTD具有强大的运载潜能,它能携带生物大分子进入细胞内,并发挥生物学活性,而且没有细胞选择性,这为临床疾病的研究和治疗提供了新的工具。本研究通过构建PTD4-GFP-VP3融合蛋白的原核表达载体,利用人源肝癌细胞株HepG2,经细胞透膜实验在激光共聚焦显微镜下观察PTD4介导的融合蛋白透膜效应,DAPI染色观测该蛋白在细胞中的定位;利用TUNEL法观察PTD4-GFP-VP3融合蛋白诱导肿瘤细胞的凋亡效应,并利用流式细胞仪检测其凋亡率等来观测PTD4-GFP-VP3融合蛋白诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡效应及其在肿瘤细胞中的定位与其凋亡效应关系的研究。结果显示: PTD4-GFP-VP3融合蛋白在孵育细胞0.5 h后即可透过细胞膜进入到细胞质中,12 h后定位于细胞核并诱导肿瘤细胞凋亡,48 h达到最高凋亡效应。结论:PTD4能携带GFP-VP3融合蛋白穿透细胞膜,在肿瘤细胞中具有核定位效应,并能诱导肿瘤细胞凋亡,为后期进一步研究VP3的凋亡机制及其抗肿瘤治疗奠定了基础。