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1、STZ诱导糖尿病大鼠模型的建立及早期糖尿病大鼠视网膜GFAP和Occludin表达的变化目的：研究糖尿病时视网膜血管内皮细胞紧密连接蛋白和胶质细胞GFAP表达的改变。方法：按60mg／kg一次性大鼠腹腔注射STZ，3d后测血糖11.0mmol／l以上为造模成功。用免疫荧光法和免疫印迹法分别从形态学和定量上观察糖尿病时视网膜血管内皮细胞Occludin和胶质细胞GFAP表达的改变。结果：糖尿病2w时，视网膜星型胶质细胞GFAP表达减少同时有Müller细胞GFAP表达增加。第12w时，星型胶质细胞GFAP表达接近消失，而Müller细胞大量表达GFAP。Occludin在正常视网膜不同血管分布不同。在糖尿病时，Occludin在毛细血管表达减少，而在视网膜动脉则表现为颗粒状沉积。结论：糖尿病时，视网膜胶质细胞GFAP表达的改变伴随着血管内皮细胞Occludin表达的变化，说明胶质细胞可能通过影响内皮细胞间的相互作用来增加BRB的通透性，导致糖尿病视网膜病变发生。2、新生大鼠视网膜Müller细胞和新生牛视网膜血管内皮细胞体外分离、培养及鉴定目的：体外分离培养新生大鼠视网膜Müller细胞和新生牛视网膜血管内皮细胞(bovein retinal vascular endothelial cells，BREC)，观察其形态、结构及生长情况。方法：以酶辅助显微分离—酶消化法分离、单独培养Müller细胞和BREC，倒置相差显微镜观察原代与传代细胞生长情况，描记生长曲线，以胶质细胞纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)抗体和Von Willebrand因子抗体分别对培养的Muller细胞和BREC进行免疫学鉴定，透射电镜观察细胞超微结构。结果：体外成功培养出Müller细胞和BREC，GFAP抗体和Von Willebrand因子抗体染色均为阳性。原代Müller细胞呈星形、不规则形，BREC呈多边形、铺路石样，传代细胞伸展更加明显，呈密集单层生长。细胞生长曲线均接近“S”形。透射电镜显示均具有正常细胞器结构。结论：体外分离结合酶消化法培养大鼠Müller细胞及BREC，实验方法操作简便，获得的细胞纯度高，符合体内生物学特性，为体外研究两种细胞的相互作用打下良好的实验基础。3、糖基化终末产物对体外培养Müller细胞生长的影响目的：探讨体外Müller细胞在糖基化终末产物(AGEs)作用下增殖活性的变化方法：采用本实验室培养及鉴定的新生大鼠Müller细胞，设置正常生长组和添加AGEs培养组，AGEs浓度在250ug／ml～1000ug／ml范围内逐步递增。MTT法测定AGEs对体外纯化培养Müller细胞增殖的影响。结果：高浓度AGEs对Müller细胞有明显的促增殖作用，并在一定的浓度范围内(250ug／ml～1000ug／ml)细胞增殖活性呈剂量依赖关系。结论：体外高浓度AGEs可促进Müller细胞异常增殖，与临床上观察到增殖性糖尿病视网膜病变时胶质细胞反应性增生情况一致，因此可以在体外用高浓度AGEs模拟体内糖尿病环境，观察胶质细胞形态和功能的改变。4、不同生长条件下Müller细胞上清液对视网膜血管内皮细胞生长的影响目的：探讨AGEs作用下异常增殖的Müller细胞对视网膜血管内皮细胞(REC)紧密连接蛋白(Occludin)表达的影响。方法：分别收集两组细胞的上清液，加入培养的BREC中，分6组观察，第①组未添加任何细胞上清液的BREC；第②组添加正常Müller细胞上清液后的BREC；第③组添加AGEs作用后的Müller细胞上清液后的BREC；第④组正常培养条件下的Müller细胞上清液；⑤AGEs作用后的Müller细胞上清液；⑥无细胞组，为空白对照组。ELISA法测定6组细胞上清液中Occludin的含量，比较其变化。结果：添加正常Müller细胞上清液组Occludin表达量最多，未添加任何细胞上清液组次之，添加AGEs作用后的Müller细胞上清液组最少。结论：正常健康的Müller细胞可分泌某些可溶性因子促进BREC表达Occludin，但在AGEs作用下，Müller细胞增殖虽加速，但抑制BREC表达Occludin。