百草枯诱导大鼠肺微血管内皮细胞凋亡实验研究

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背景和目的:百草枯是广泛使用的除草剂,也是人类常见致命性的急性中毒源。百草枯的肺毒性在于通过增加氧化应激导致肺损伤,而氧化应激可能是导致细胞凋亡的最后共同通路。众所周知,百草枯可以在体内外产生氧自由基损伤肺微血管内皮。然而,在百草枯所致的肺损伤中,百草枯能否诱导肺微血管内皮细胞的凋亡及其机制仍不清楚。近来已有研究显示百草枯可以诱导某些细胞的凋亡。在本研究中,检测了百草枯对培养的大鼠肺微血管内皮细胞的直接毒性和凋亡的影响,旨在为百草枯中毒机制研究提供一定的理论基础。方法:雄性SD大鼠肺微血管内皮细胞的原代培养和鉴定。培养的大鼠肺微血管内皮细胞在不同浓度百草枯的培养基中培养不同时间,通过MTT法、DNA片断(琼脂糖凝胶电泳)、细胞核形态学(DAPI染色)、流式细胞术来检测百草枯对大鼠肺微血管内皮细胞的毒性和凋亡的影响。结果:成功地培养出大鼠肺微血管内皮细胞。MTT法测试发现百草枯对大鼠肺微血管内皮细胞的增殖代谢活性具有剂量和时间依赖性的抑制作用;琼脂糖凝胶电泳显示凋亡的DNA阶梯;通过形态学观察,发现细胞凋亡的特征如核固缩、核碎裂;流式细胞术(PI染色)揭示凋亡峰出现。结论:百草枯在体外对大鼠肺微血管内皮细胞的增殖具有抑制作用并能诱导其凋亡;肺微血管内皮细胞凋亡可能是百草枯所致的急性肺损伤的机制之一。
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