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1.目的研究ATP(三磷酸腺苷)生物荧光法和菌落计数法检测不同浓度的6种病原微生物方法之间的相关性；观察ATP生物荧光检测技术检测细菌的稳定性和重复性,以及不同消毒剂对其影响；ATP生物荧光检测技术在现场清洁和消毒效果评价的应用情况,为制定以ATP生物荧光检测技术为代表的消毒效果快速评估技术提供实验和数据支持。2.方法2.1通过ATP生物荧光检测系统与其配套的试剂盒对细菌悬液进行定量检测6种代表性微生物大肠杆菌(肠道感染菌),金黄色葡萄球菌(化脓性菌),铜绿假单胞菌(院内感染菌),白色念珠菌(致病性真菌),龟分枝杆菌脓肿亚种(结核分枝杆菌)、枯草杆菌黑色变种芽孢(芽孢),与菌落计数法平行比较,通过统计图描述两种方法的线性关系。2.2选用ATP生物荧光检测法连续三天重复测定同一份经过菌落计数的(1×101cfu/ml-1×106cfu/ml)标准大肠杆菌(ATCC8099);重复三天测定同一份经过菌落计数的(1×105cfu/ml)标准大肠杆菌(ATCC8099)的ATP含量值,通过重复测量的单因素方差分析法对相关性进行球形检验,并采用Geehouse-Geisser和Huynh-Feldt校正检验,检验ATP法的稳定性。2.3通过消毒中和剂选择实验和细菌悬液定量杀灭实验,筛选出符合本次实验用的三种消毒剂(0.05%次氯酸钠、0.55%邻苯二甲醛、70%乙醇)的中和剂和消毒剂效果。2.4选取大肠杆菌(ATCC8099)和ATP标准品在三种消毒剂不同时间作用后,通过ATP法检测验证消毒剂对其影响程度。2.5使用检测灵敏度为1×10-15mole ATP的检测仪器和专用采样棒比对菌落计数法评价医院Ⅲ类区域普通住院病区经过不同清洁方式作用后环境物体表面清洁度；使用ATP检测灵敏度是1×10-18mole ATP台式检测仪比对菌落计数法评价医院Ⅲ类区域普通住院病区后环境物体表面消毒效果,非参数Mann-Whitney检验对结果进行统计分析。2.6使用ATP检测灵敏度是1×10-18mole ATP台式检测仪比对菌落计数法评价5处经过高水平消毒剂作用的场所外环境消毒效果,都以消毒前后下降率90%为合格标准,通过配对卡方检验进行结果分析。3.结果3.1ATP法与菌落计数法在六种菌悬液方法比对结果菌落计数为1.0×101-1.0×106 cfu/ml的铜绿假单胞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌在不同细菌浓度值与ATP检测值相比,对数值之间分别存在线性关系,大肠杆菌回归方程为回归方程为(Y=0.831X+0.3239,R2=0.9261)；金黄色葡萄球菌回归方程为(Y=0.9983 X-0.0633,R2=0.9913)；铜绿假单胞菌回归方程为(回归方程为Y=0.8736X-0.0741,R2=0.9778)；在细菌悬液菌落计数为1.0×101-1.0×105 cfu/ml范围内白色念珠菌菌悬液菌值与ATP对数值之间呈线性关系(Y=1.4867X-2.707,R2=0.926)；在细菌悬液菌落计数为1.0×102-1.0×107 cfu/ml范围内龟分枝杆菌菌悬液菌值与ATP值之间呈线性关系(Y=0.9639X+2.0683,R2=0.979)；在芽孢悬液菌落计数为1.0×102-1.0×105 cfu/ml范围内芽孢悬液值与ATP对数值之间呈线性关系(Y=1.9897X-0.9677,R2=0.9211)。3.2ATP方法检测大肠杆菌稳定性实验结果三天内重复测量同一份不同浓度大肠杆菌ATP值,线图变化显示结果值趋于一致,ATP法稳定性比较高；同一份浓度为1×105cfu/m1的大肠杆菌标本进行10次ATP测定结果通过单因素重复测量资料的方差分析：球形检验结果P=0.896(>0.05),Geehouse-Geisser校正后F=0.111P=0.895(>0.05),Huynh-Feldt校正后F=0.111P=0.896(>0.05)。3.3实验用的消毒剂中和剂选择实验结果悬液定量杀菌试验显示经过0.05%次氯酸钠、0.55%的邻苯二甲醛、70%的乙醇消毒液作用1分钟,5分钟,10分钟后随着消毒剂作用时间的延长,大肠杆菌残留的菌悬液值与ATP值作统计学分析发现,菌落计数值与ATP对数值之间呈线性关系,经过中和剂可及时阻断消毒剂继续作用,不影响检测试剂的作用。3.4实验用的消毒剂对ATP标准品的影响实验结果ATP检测试剂的标准品做对照检测值对数值为5.95；0.05%次氯酸钠的消毒液作用1分钟,5分钟,10分钟,30分钟对数值分别为5.72、5.32、5.26、5.24、5.18；含0.55%的邻苯二甲醛的消毒液作用作用1分钟,5分钟,10分钟,30分钟对数值分为5.65、5.61、5.53、5.57、5.48；含70%的乙醇的消毒液作用1分钟,5分钟,10分钟,30分钟对数值分别为5.71、5.77、5.60、5.64、5.61,随着标准品与消毒剂作用时间的延长,对数值略有下降。3.5不同检测灵敏度ATP检测仪与菌落计数法评价医疗机构物体表面清洁度和消毒效果比对结果不同评价方法评价两种清洁方式显示经过普通棉布加自来水清洁后结果检出率要高于含0.3%复合季铵盐成份的一次性消毒湿巾清洁方式,表明评价一致性较高。40份使用ATP手持机检测经过普通棉布加自来水清洁方式的结果Md值与IQR值为215RLU/100cm2和372RLU/100cm2,40份使用ATP手持机检测经过含0.3%复合季铵盐成份的一次性消毒湿巾为清洁方式的Md值与IQR值分别为27RLU/100cm2和76RLU/100cm2;40份使用菌落计数法检测经过普通棉布加自来水清洁方式的结果Md值与IQR值38cfu/cm2、117cfu/cm2,40份使用菌落计数法检测经过含0.3%复合季铵盐成份的一次性消毒湿巾为清洁方式的Md值与IQR值分别为14 cfu/cm2、71cfu/cm2。20份经过含氯消毒剂作用前后的ATP下降值的Md值与IQR值分别为170.5(2amole/cm2)和233.75(2amole/cm2),菌落计数下降值的的Md值与IQR值分别为140cfu/cm2、102 cfu/cm2,P=0.137(>0.05).3.6 ATP高灵敏度检测仪在评价现场外环境消毒效果的结果5处不同场所各15份样本消毒前和消毒后,菌落计数法和ATP法合格率通过配对卡方检验显示P>0.05(P=0.070)。4.结论在一定浓度范围内菌落计数法与ATP法很高的相关性；ATP法检测细菌的含量稳定性较高；使用中和剂作为采样液不影响ATP检测效果；消毒剂ATP试剂标准品的无影响；ATP检测技术虽然作为一种快速检测方法,但是对于不同的检测目的(清洁效果、消毒效果)需要正确选择不同灵敏度的检测仪器才能达到预期效果。