【摘 要】
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目的:研究酒精诱导的酒精性脂肪肝模型,以及丹皮酚在治疗酒精性脂肪肝过程中的作用机制,明确Adip/CaMKKβ/AMPK信号通路在丹皮酚治疗AFLD(Alcoholic fatty liver disease)过
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目的:研究酒精诱导的酒精性脂肪肝模型,以及丹皮酚在治疗酒精性脂肪肝过程中的作用机制,明确Adip/CaMKKβ/AMPK信号通路在丹皮酚治疗AFLD(Alcoholic fatty liver disease)过程中的作用。方法:1.首先用肝脏病理切片来验证酒精诱导小鼠的酒精性脂肪肝模型是否成立。其次,在AFLD模型的基础上,通过ELISA法检测小鼠血清中炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的水平和TG、TC的水平。同时通过半定量PCR法、qRT-PCR法检测小鼠肝组织中AdipR1、CaMKKβ、AMPKα和SREBP1c的核酸水平;以及通过Western blot法检测小鼠肝组织中AdipR1、P-CaMKKβ、CaMKKβ、P-AMPKα、AMPKα和SREBP1c的蛋白水平;用ELISA法检测血清中Adip和ACC的表达水平。2.用酒精诱导AML-12细胞,采用油红O染色法验证细胞的AFLD模型是否成立。在AFLD模型的基础上,通过ELISA法检测细胞中炎症因子水平和TG、TC的水平。同时通过半定量PCR法、qRT-PCR法在核酸水平上检测以及通过Western blot法和ELISA法在蛋白水平上检测上述动物实验中的各表达情况。结果:无论是小鼠体内还是体外细胞系,与正常组相比,在酒精诱导下,Adip水平显著降低(P<0.01),但AdipR1表达水平无显著变化(P>0.05);IL-1β、TNF-α和TG、TC含量都明显上升(P<0.01);而CaMKKβ与AMPKα,无论是核酸水平(P<0.05)还是蛋白磷酸化水平(P<0.01)皆显著性降低;SREBP1c表达显著增加(P<0.01),ACC含量也大大升高(P<0.01)。与Et OH组相比,Pae组提升了Adip水平(P<0.05),其受体1依然无显著改变(P>0.05);降低了炎症因子的表达;脂肪含量(TG、TC)被显著降低(P<0.05);对于CaMKKβ与AMPKα,在核酸水平和蛋白磷酸化水平皆有显著提升(P<0.01);SREBP1c表达被抑制(P<0.05),ACC含量显著性降低(P<0.05)。结论:丹皮酚治疗酒精性脂肪肝的作用机制中,基于了Adip/CaMKKβ/AMPK这条信号通路来改善酒精诱导引起的脂肪变性损伤的情况。
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