抗生素是临床上治疗细菌性感染的主要药物。抗生素的大规模使用加快细菌产生耐药性。耐药细菌的出现和广泛传播给临床抗感染治疗带来严峻的挑战,并严重影响人类的健康。细菌对抗菌药物的耐药已成为全球关注的热点。细菌耐药性检测对细菌感染的及时精准治疗、病原菌流行病学研究以及减少细菌耐药情况的发生与传播等方面,都具有十分重要的意义。目前大多数临床实验室对于细菌耐药性的检测方法主要采用传统表型检测即药敏试验。药敏试验检测流程需要48-72小时,出具耐药情况的检测报告存在明显的滞后性。因此急需开发一种快速全面的耐药检测技术以满足临床诊断需求。本论文以多重探针熔解曲线技术为基础,建立针对产β-内酰胺酶的革兰氏阴性菌以及常见的耐药革兰氏阳性菌的耐药基因检测体系。第一章为前言部分,首先介绍了细菌耐药全球流行概况、细菌耐药机制,然后概述了目前主要的细菌耐药检测方法,并评价各种方法的优缺点,最后在此基础上提出本论文的研究目的、研究内容和研究意义。第二章,我们基于熔解阵列法和多色探针熔解曲线分析技术,设计了A、B双管耐药基因检测体系以及SHV/TEM-ESBLs分型体系。A管体系检测革兰氏阴性菌由于产β-内酰胺酶而耐受β-内酰胺类药物的28个耐药基因,基本覆盖了β-内酰胺酶的所有类型;B管体系检测革兰氏阳性菌耐受甲氧西林类药物、万古霉素类药物和大环内酯类药物的13个耐药基因。完成体系建立后,我们用阳性质粒参考品对体系的特异性、灵敏度、重现性等性能加以考察。结果A、B检测管的检测特异性为100%,对各个耐药基因的检测灵敏度为5-50拷贝/反应,重复性验证的SD值小于0.3,CV值小于0.5%。以上技术指标表明我们建立的体系可以准确地识别每种耐药类型,并且检测结果重复性良好。第三章,我们对所建立的检测体系进行了大样本量的临床试验。本次临床试验共入组了2108株临床分离菌,其中包括1491株革兰氏阴性菌和617株革兰氏阳性菌。检测结果分别与临床药敏试验结果进行对照。对于革兰氏阴性菌样本,我们体系检测结果相对于药敏结果的灵敏度和特异性分别为87.7%和92.4%(Kappa=0.803,P<0.001);对于革兰氏阳性菌样本,我们体系检测结果相对于药敏结果的灵敏度和特异性分别为92.7%和97.3%(Kappa=0.892,P<0.001)。临床试验数据表明本体系检测结果与药敏试验检测结果一致性良好。综上所述,我们在本论文中建立了一种简单快速,灵敏度高,特异性好,并且全面覆盖主要细菌耐药基因的检测体系。与传统的表型检测方法相比,本体系具备检测时间短,人工操作少,成本低,检测通量高等显著优点。临床试验数据证实了本体系无论对革兰氏阳性菌还是对革兰氏阴性菌都表现出优秀的检测能力。因此本体系可以为细菌性感染患者提供快速的耐药诊断,辅助临床医生为患者及时制定有效的抗菌治疗方案,并成为细菌耐药流行病学研究的有力工具。