轮状病毒是引发全世界儿童严重腹泻的重要因素,该病毒引发的感染不仅严重影响婴幼儿的健康及生存质量,还给家庭及社会带来巨大的经济负担,由此可见,轮状病毒感染已经在世界范围内成为一项亟待解决的重要公共卫生问题。目前尚没有治疗轮状病毒感染的特效药,因此,研究一种快速并准确的轮状病毒早期检测方法,对于该病毒的防治具有深远的意义。单克隆抗体具有特异性强,灵敏度高的特点,如果将其应用于轮状病毒检测方法,则可对轮状病毒感染患者进行及时的诊断。本课题致力于制备抗轮状病毒的单克隆抗体,为建立一种高效的轮状病毒诊断检测方法提供基本依据。论文的第一章介绍了与轮状病毒相关的基础知识,包括病毒的形状及生物学特性,还综述了近年来轮状病毒的常见检测手段,并且根据自己的实验工作经验总结陈述了单克隆抗体制备过程中的影响因素。由于单克隆抗体的制备实验周期较长,实验步骤较多,一旦出现问题,会直接影响最终的结果,因此这一部分还列举了实验各个环节的注意事项,以避免相关人员在研究过程中出现较多问题。论文第二章通过考察各个环节的实验条件,包括抗原、血清的稀释倍数,封闭液的选择、封闭条件的确定,酶标二抗的包被时间以及底物液的显色时间。建立了一种针对轮状病毒蛋白质的ELISA检测方法,便于在单克隆抗体的制备过程中进行相关抗体的检测。论文第三章介绍了通过细胞融合获得单克隆杂交瘤细胞的过程,包括小鼠的免疫、细胞融合、阳性杂交瘤的筛选和培养以及单克隆杂交瘤的获得。本课题最终得到了五株能够稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株:1B3-A2、1B3-C3、2B4-A9、3D19-C2、4E22-B10。论文第四章研究了大量制备单克隆抗体后,对该抗体进行纯化,并且进一步考察了抗体纯化后浓度、特异性以及生物学特性。通过单克隆抗体叠加实验,可得出除1B3-A2和4E22-B10两株单克隆杂交瘤细胞分泌的抗体有可能针对相同的抗原表位,1B3-C3、2B4-A9、3D19-C2等单克隆抗体均可能针对不同的抗原表位。