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紫花苜蓿在植物分类学上属于于双子叶植物豆科苜蓿属,是一种在全世界范围广泛种植的优良牧草。由于苜蓿的适应性强,而我国的盐碱地面积正在逐年增加,筛选出耐盐性强的紫花苜蓿品系在实践上有十分积极的作用。本试验通过诱变育种技术结合组织培养技术,探索了筛选耐盐紫花苜蓿的条件,并筛选出了耐盐的紫花苜蓿突变体单株,初步确定了试管苗移栽的条件,并对筛选出的21个突变体株系进行了ISSR分析。本试验的主要研究结果如下: 1、紫花苜蓿无菌苗诱导产生的愈伤组织可以在2-100Gy的60Co-射线辐射剂量下存活,研究在9个辐射梯度下,与对照相比,28天后各个梯度下愈伤组织的相对增加率,确定辐射紫花苜蓿愈伤组织的最佳剂量是40Gy。通过对愈伤组织在高盐浓度下的死亡率研究,确定10Gy、20Gy、40Gy、60Gy辐射剂量下的愈伤组织在10g/L NaCl浓度下的死亡率分别为20.00%、25.00%、19.00%、18.00%;在15g/L NaCl浓度下的死亡率分别为45.70%、44.70%、52.60%、53.60%;所有剂量下的愈伤组织均不能在20g/LNaCl浓度下的培养基上存活。将愈伤组织与不同浓度的NaCl共培养,发现不同辐射剂量下愈伤组织的成苗率不一样,盐浓度为0时,对照的成苗率最高;盐浓度为3g/L和5g/L时,2Gy辐照剂量下愈伤组织的成苗率最高;盐浓度为7gL时盐浓度;20Gy辐照剂量下愈伤组织的成苗率最高;盐浓度为10g/L和15g/L时,40Gy辐照剂量下愈伤组织的成苗率最高。 2、在紫花苜蓿试管苗的移栽中,试管苗的生根尤为重要。本试验探索了两种不同的植物激素NAA和IBA分别在两种不同的浓度下对试管苗生根的影响。当NAA浓度为0.2mg/L时,试管苗的生根率最高,生根率为33.33%。另外探索了不同炼苗方法和不同基质对试管苗存活率的影响。研究结果表明,当试管苗不进行炼苗时,存活率最高。当基质使用全部为蛭石时,试管苗的存活率最高。 3、用ISSR分子标记对获得的21个耐盐突变体株系进行分析,利用39条ISSR引物可以产生262个条带,其中多态性条带为185条,多态性条带比率为70.61%。引物可以扩增出来的条带范围为1-11条。扩增出多态性条带最多是引物8,为10条;最少的是引物20,引物861,引物62为1条。对ISSR扩增结果进行聚类分析,遗传相似系数的变异范围为0.637-0.996。以遗传相似系数0.79为阈值可以将试验材料分为4个集群,其中C11,C13,C15为第一个集群,这三个突变体株系都是在40Gy的辐射浓度下生长出来的;C9为第二个集群;C16为第三个聚群;剩下的15个突变体和对照为第四个集群。