疾病发病率中心血管疾病的发病率已跃居世界首位。据统计全球有每年大约1700万人口死于心血管疾病以及各种并发症。因此对心血管疾病发生的分子机制开展研究以及寻找相应对策是非常重要的。脊椎动物心脏发育的过程是一个由多基因调控的复杂的网络体系。果蝇心管与哺乳动物心脏的早期发育有着惊人的相似性,遗传背景清晰、个体小、生命周期短、易于饲养,因而成为研究心脏发育与心脏功能的理想模式动物。有研究表明,如果某一基因在同一时间与一群位于不同染色体上的基因汇聚在同一区域内进行RNA转录,则初步表明该基因可能通过“转录工厂”同时调控这一组基因的转录调控。已有研究表明TGFβ1可能通过“Smad”转录工厂调控不同的Smad基因的转录。本实验室前期研究发现,TSRM1敲除的果蝇在心脏发育后期,Dpp信号部分成员转录本同时消失。而TSRM1过表达后,这些成员转录本同时上调,似乎提示TSRM1有可能是通过“Smad”转录工厂进行调控。荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization)是一种细胞遗传学技术,可以用来对核酸进行检测和定位。荧光标记的核酸探针只和具有高度相似性的核酸杂交,可用于染色体上基因的定位。FISH可验证TSRM1“转录工厂”是否存在。因此,本论文进行该项研究的前期工作:克隆果蝇“Smad”转录工厂成员以及相关心脏发育基因的基因组DNA,以备用以制备荧光原位杂交的探针,探索心脏发育基因是否是“Smad”转录工厂的成员,以及TSRM1是否调控“Smad”转录工厂成员的转录表达。本文利用重组克隆技术克隆每一基因的5kb基因组DNA,这些基因是果蝇Dpp信号通路成员tkv、Dpp、dad、babo、mad、smox、med,果蝇心脏发育基因tin、prc、zfh1、odd、H15、eve、svp、pnr,以及人类基因BMP2、BMP4、GTF2A1、TGFβR1等。首先提取果蝇的基因组DNA,以此为模版对每一基因进行PCR扩增。再将5kb基因组序列插入p GEM-T载体构建重组质粒。最后经DNA测序证明克隆基因是否正确。经努力,本文成功克隆了23个基因的5Kb基因组DNA片段,为进一步利用这些质粒构建荧光原位杂交的探针,探索其它基因是否是“Smad”转录工厂的成员,以及TSRM1是否调控“Smad”转录工厂成员的转录表达迈出了第一步。总之,由于用于FISH探针所需的基因组DNA长度较长,传统克隆方法难以满足要求,故本人采用一步克隆法构建5kb的DNA质粒,并成功克隆构建了23个基因的5kb质粒,为进一步的研究工作奠定了基础。