【摘 要】
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目的: 研究肾癌肿瘤相关抗原G250及G250蛋白多糖(PG)区基因的克隆，蛋白表达及鉴定。 方法: 从肾癌细胞786-0中提取mRNA，采用RT-PCR方法扩增出G250及G250 PG区cDNA。将获得的
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目的: 研究肾癌肿瘤相关抗原G250及G250蛋白多糖(PG)区基因的克隆，蛋白表达及鉴定。
方法: 从肾癌细胞786-0中提取mRNA，采用RT-PCR方法扩增出G250及G250 PG区cDNA。将获得的cDNA片段插入pET28a(+)表达载体，构建重组质粒pET-28a(+)-G250/pET-28a(+)-G250 PG，转化DH5a大肠杆菌。通过PCR鉴定筛选出正确的重组子，并用其转化BL21 Codon Plus菌。采用IPTG诱导工程菌进行诱导表达，SDS-PAGE及Western blot鉴定。
结果: 克隆的基因经测序证实，G250/G250 PG区序列正确。构建重组质粒pET-28a(+)-G250/pET-28a(+)-G250 PG，并在原核系统中表达G250/G250 PG重组蛋白，目的蛋白均具有较好的抗原性和特异性。
结论: 成功完成G250/G250 PG区基因克隆及表达，为在G250/G250 PG蛋白纯化基础上进行抗体制备和G250功能研究提供了实验依据。
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