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目前我国生产的猪瘟活疫苗分为两类,一类为组织毒疫苗,另一类为细胞毒疫苗。猪瘟组织苗是将猪瘟兔化弱毒接种家兔,收获感染家兔的脾脏和淋巴结,制成乳剂,加入适当稳定剂,冷冻真空干燥而制成。由于猪瘟组织苗直接采用家兔生产,而兔出血症(Rabbit haemorrhagic disease,简称RHD)是目前家兔的主要病毒性传染病,且有些家兔感染兔出血症病毒(Rabbit haemorrhagic disease virus, RHDV)发病症状不明显,这导致脾淋源猪瘟活疫苗生产过程中有可能污染RHDV。用于RHDV的检测方法主要有血凝和血凝抑制试验、兔体中和试验、酶联免疫吸附试验、分子生物学检测方法,这些方法大多用于疫病的诊断,因此建立一种猪瘟活疫苗中RHDV的检测方法,确保猪瘟活疫苗的安全、有效是非常必要的。本研究根据GenBank已登录的RHDV的VP60基因保守序列,利用Primer5.0设计了一对可扩增出大小为370bp条带的引物,并建立了检测RHDV的RT-PCR方法。研究结果表明该方法仅能从RHDV样品中扩增出大小为370bp目的条带,对与兔相关的病原如大肠杆菌、巴士杆菌、轮状病毒及与猪相关的病毒如猪瘟兔化弱毒、牛病毒性腹泻/粘膜病病毒、狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒的检测均为阴性,最低检出量为10-6因此本研究所建立的RHDV RT-PCR方法是特异、敏感的。采用RHDV夹心ELISA与RT-PCR方法对人工模拟污染脾淋源猪瘟活疫苗中的RHDV进行了检测。RT-PCR方法检测结果表明,可以检测到污染疫苗中的RHDV的最低检出量为10-5,而不含脾淋源猪瘟活疫苗成分的RHDV对照组可以检测到的最低检出量为106。RHDV的夹心ELISA检测结果表明,可以检测到污染疫苗中的RHDV的最低检出量为101,而不含脾淋源猪瘟活疫苗成分的RHDV对照组可以检测到的最低检出量为102。两种方法检测结果的比较说明RHDV的RT-PCR检测方法比夹心ELISA抗原检测方法更敏感。用RHDV ELISA检测方法与RT-PCR方法对15批商品猪瘟活疫苗分别进行了RHDV污染检测。RT-PCR方法检测的阳性率为3/15,而RHDV夹心ELISA检测的阳性率为2/15。该检测结果揭示我国现有的商品猪瘟活疫苗有一定比例的RHDV污染,也进一步证实了建立的RHDV RT-PCR检测法的敏感性高于ELISA检测法。通过本研究,制定了采用RT-PCR方法检测兔源猪瘟活疫苗中RHDV污染的标准操作程序和质量标准,为兔源猪瘟活疫苗外源病毒检验提供一种体外检测方法。