目的:研究氧化低密度脂蛋白跨内皮细胞转运的方式,试图揭示caveolae在胆固醇流出中的作用机制,并探讨caveolin-1与内皮细胞胆固醇摄取间存在的关系,寻找是否存在调节关系。方法:用40μg/ml氧化低密度脂蛋白处理人脐静脉内皮细胞不同时间,分别用荧光和HPLC观察细胞内胆固醇含量变化;随后将已用氧化低密度脂蛋白荷脂的人脐静脉内皮细胞,撤去氧化低密度脂蛋白后再观察细胞内胆固醇含量变化。分别用三种caveolae阻滞剂carrageenan、filipin、nocodazole预处理人脐静脉内皮细胞1h后与40μg/ml氧化低密度脂蛋白孵育24h,用荧光倒置显微镜观察内皮细胞荷脂情况。将人脐静脉内皮细胞种植于transwell培养系统套皿上层,分别用三种阻滞剂预处理细胞1h后加入40μg/mlDiI荧光标记的氧化低密度脂蛋白于套皿上层孵育24h,取套皿下层液体用荧光分光光度计测荧光值。用FITC标记LOX-1后,用nocodazole阻滞cavolae运动,用荧光倒置显微镜观察LOX-1的运动情况。利用caveolin-1 SiRNA干扰技术沉默内皮细胞caveolin-1表达,同时检测内皮细胞在氧化低密度脂蛋白作用下NF-κB和LOX-1的表达情况。结果:实验表明人脐静脉内皮细胞与氧化低密度脂蛋白孵育时,细胞荷脂呈时间依赖性增加,撤去氧化低密度脂蛋白后细胞内脂质逐渐减少。caveolae阻滞剂可明显阻滞内皮细胞对ox-LDL摄取,同时也可明显阻滞氧化低密度脂蛋白跨内皮细胞转运达49%, 72%和80%。免疫荧光结果表明LOX-1定位于caveolae中。SiRNA干扰实验表明沉默caveolin-1表达后,抑制了NF-κB核转位,同时LOX-1表达下调。结论:1.内皮细胞可摄取ox-LDL而荷脂,也可自发性流出所荷脂质。内皮细胞的ox-LDL受体-LOX-1-定位于caveolae中,caveolae在内皮细胞摄取ox-LDL的过程中起了一个运载体的作用,它同时也介导了ox-LDL的跨内皮细胞转运。2. caveolin-1促使NF-κB核转位而活化,进一步上调LOX-1表达。