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第一部分 干预肠道共生菌可出现肠炎后黏膜愈合障碍目的及内容明确应用不同抗生素干扰肠道共生菌后,实验性肠炎恢复期肠道IL-22/pSTAT3轴组分以及反映炎症持续/消退与上皮修复情况的指标的变化情况,为进一步的机制研究建立稳定可重复的动物模型,初步确定肠道菌群对小鼠恢复期的影响模式。方法使用针对不同菌群的抗生素干预肠道菌群后,使用DSS诱导实验性肠炎模型建立,记录炎症急性期及恢复期体重变化及死亡率,从组织学层面检查黏膜修复情况,从mRNA及蛋白水平检测反映炎症持续/消退与上皮修复情况的指标的变化情况。结果针对Gram+的万古霉素导致小鼠实验性肠炎后体重恢复延迟,肠黏膜修复障碍,同时肠组织IL-22及pSTAT3表达量显著减低。STAT3下游的与肠粘膜上皮细胞再生相关的生长因子EGF及VEGF表达量也有相应的降低。结论万古霉素清除肠道G+共生菌后出现炎症后肠道黏膜修复障碍,机体正常的IL-22分泌受抑制。第二部分 干预肠道共生菌可抑制肠道ILC3增殖及分泌目的及内容表达RORγt的肠道先天淋巴细胞RORγt+ILC为肠炎修复期最主要的IL-22来源,研究ILC3的功能状态与调控模式,将是阐明IL-22/pSTAT3通路在炎症恢复期作用的理想切入点。在这部分实验中我们旨在明确使用万古霉素去除肠道G+共生菌后ILC3细胞数目及分泌功能变化情况。方法获取各组小鼠固有层淋巴细胞后,使用流式细胞学检测各组ILC细胞数量,Ki67表达量,及标志性的细胞因子表达量,将万古霉素组结果与SPF组及新霉素组比较。体外培养分选获得的ILC3细胞,使用IL-23刺激后观察IL-22表达量。结果小鼠DSS诱导实验性肠炎恢复期肠道IL-22主要来源于RORγt+ILCs,万古霉素处理后小鼠实验性肠炎恢复期RORγt+ILCs数目及增殖能力下降,IL-22分泌水平下调,过量IL-23可使ILC3细胞的IL-22分泌能力恢复。与此同时,Tbet+ILC1-IFN的表达量以及RORγt+ILC3-IL17的表达量未受到抑制。结论万古霉素作用后IL-22/pSTAT3通路抑制,很可能源于ILC3细胞增殖及分泌能力受损第三部分 ILC3增殖及功能缺陷可能源于树突状细胞迁徙及分泌障碍目的及内容吞噬细胞与ILC3的相互作用可能参与了天然免疫系统维持肠粘膜稳态以及IBD的起病和进展。CX3CR1+树突状细胞被证明是炎症状态下肠道IL-23最主要的来源,在本部分实验中,我们着重分析了实验性肠炎恢复期,尤其是干预肠道共生菌后结肠固有层树突状细胞数量及功能状态的变化,结合下游ILC功能与数目的相应变化,初步明确肠道菌群对IL-22/pSTAT3分子轴的调控机制。方法使用流式细胞学检测并比较万古霉素组与SPF组及新霉素肠道固有层树突状细胞数目及分泌功能状态,从mRNA及蛋白水平检测树突状细胞趋化、分化所需肠道细胞因子表达量水平变化情况。结果万古霉素组作用后小鼠肠组织中IL-23表达量降低,肠固有层中CX3CR1+DC数目减少,肠组织中趋化CX3CR1+DC前体的细胞因子表达量减少。结论使用万古霉素去除肠道G+共生菌后,招募分化形成的固有层的CX3CR1+DC数目明显减少,IL-23分泌量降低,可能为恢复期ILC3增殖及功能障碍的主要原因。第四部分 补充G+共生菌胞壁成分不能完全恢复黏膜愈合能力目的及内容在前三部分的实验中我们初步确定使用万古霉素清除小鼠肠道中的G+共生菌可导致小鼠DSS实验性肠炎后黏膜愈合障碍。在本部分实验中,我们为万古霉素组小鼠补充共生菌胞壁成分胞壁酰二肽,刺激Nod2受体,模拟G+共生菌对肠道先天免疫系统的刺激,观察其对肠道愈合过程的影响,以期明确共生菌-DC-ILC调控通路在肠炎愈合中的意义。方法万古霉素干预肠道菌群并使用DSS诱导实验性肠炎模型建立后,补充胞壁酰二肽,记录体重变化及死亡率,HE染色确定组织修复情况,同时用流式细胞学检测DC-ILC细胞数目变化结果补充胞壁酰二肽可令万古霉素组小鼠有效招募CX3CR1+DC,但未能有效促进万古霉素小鼠肠炎愈合以及刺激ILC3增殖及分泌IL-22。结论提示除Nod2通路外,肠道G+共生菌还通过了其他途径促进ILC细胞增殖,维持IL-22分泌。