P19细胞过表达外源Necdin对其细胞增殖的影响

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Necdin是MAGE(melanoma-associated antigen)家族Ⅱ类重要成员之一,主要表达在神经发育过程中所有分裂的神经元及分化后的神经元中。目前研究已发现Necdin在神经系统中发挥重要的生理功能:Necdin能够结合E2F1转录活性域,抑制细胞生长;与p53作用等调控凋亡;与p75 NTR作用,参与NGF诱导的p75信号通路,促进神经元分化;与PWS发生密切相关[1-5]等。随着研究进展,Necdin的重要性得到越来越多的关注。而过表达外源Necdin对P19细胞的细胞周期和增殖是否有影响,目前还没有相关报道。本课题将在实验室前期良好的研究基础上探讨过表达外源Necdin对P19细胞的细胞周期和增殖的影响。  实验中通过构建真核表达载体及制备稳定表达细胞克隆并对稳定转染pCMV-tag2B-Necdin及PcDNA3.1-Necdin后稳定过表达外源Necdin的P19细胞克隆用WestemBlot方法验证Necdin表达量,用流式细胞术和CCK-8法分别检测过表达的外源Necdin后P19细胞周期和细胞增殖的变化。  探究发现,和正常P19细胞相比,过表达外源Necdin的P19细胞克隆的细胞周期及增殖没有明显变化,即:P19细胞过表达外源Necdin对其细胞周期和增殖没有明显影响。而对于高表达Necdin对P19细胞周期和增殖没有明显影响的具体机制尚需进一步探究。
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