【摘 要】
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近年来,现代生活节奏不断加快,亚健康状态人群迅速猛涨,人们对保健品的需求呈井喷式增长。目前,将传统中草药及其提取物作为保健品的开发原料已受到广泛的关注,并已有了大量的研发,但其多数集中在宏观复方中药阶段,而利用纳米药物载体技术开展保健品的相关研究鲜有报道。已有研究表明,肉苁蓉（Cistanche deserticola Ma）、锁阳（Cynomorium songaricum Rupr）、淫羊藿（
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近年来,现代生活节奏不断加快,亚健康状态人群迅速猛涨,人们对保健品的需求呈井喷式增长。目前,将传统中草药及其提取物作为保健品的开发原料已受到广泛的关注,并已有了大量的研发,但其多数集中在宏观复方中药阶段,而利用纳米药物载体技术开展保健品的相关研究鲜有报道。已有研究表明,肉苁蓉（Cistanche deserticola Ma）、锁阳（Cynomorium songaricum Rupr）、淫羊藿（Epimedium brevicornu Maxim）、枸杞（Lycium barbarum）均具有较好的抗疲劳、抗氧化活性和增强免疫等保健功能,并具有很强的补肾壮阳作用;HP-β-CD因其内腔疏水、外侧亲水的空洞结构特性使其成为一种优良的纳米药物载体,但其与复方中药保健品开发相关的研究尚无报道。本研究先采用乙醇提取法提取以上四种中药材并得到相应乙醇提取物,按照一定比例混合后再通过饱和水溶液法制备复方提取物-HP-β-CD包合物纳米微粒,在包合条件单因素实验的基础上,使用响应曲面分析法优化并验证制备工艺,然后通过UV、DSC、FESEM三种方法对包合物进行评价与鉴定;对制备成功的包合物,采用急性毒性实验验证其安全性;通过测定大鼠相对肥满度、力竭游泳时间、血清CAT、SOD活力和IL-2、TNF-a水平、肠道微生物变化,以探究其对大鼠的保健功能;通过观察雄性大鼠捕捉潜伏期、爬跨潜伏期、爬跨频次和射精频次等性行为参数,分析睾丸组织H＆E染色切片,检测曲细精管直径、血清中睾酮和环磷酸鸟苷的含量,探究包合物对大鼠生殖功能的影响。主要研究结果如下:1.四种中药采用75%乙醇提取法经过旋转蒸发、浓缩、烘干后得到植物提取物,肉苁蓉、锁阳、淫羊藿、枸杞子的出膏率分别为25.28%、24.61%、16.39%、21.87%。2.在不考虑因素间互相影响前提下,包合物的最佳制备条件是主客体质量比2:1、包合温度50℃、包合时间4 h;在此基础上设计三因素三水平响应曲面分析实验优化制备工艺,得到的包合条件为主客体质量比2.13:1、温度48.13℃、时间4.04 h,经过三次重复验证,此工艺下的包合率为82.76%略高于模拟值,其RSD值为1.35%,表明该制备工艺具有良好的重复性,合理可行,具有较高的应用价值。3.与提取物相比,包合物溶解度大大增加,气味也得到明显的掩盖;使用UV、DSC、FESEM三种表征鉴定方法发现,与HP-β-CD、复方中药提取物和物理混合物相比,包合物呈现了不同的紫外吸收峰和热力学效应,扫描电镜下呈现出完全不同的形状;基于此可以认为包合物纳米微粒制备成功。4.急性毒性实验结果表明,包合物在2000 mg/kg的超高剂量下仍具有良好的安全性;与对照组相比,包合物显著增加大鼠相对肥满度（P＜0.05）,延长力竭游泳时间（P＜0.05）,提高 CAT和 SOD 活性（P＜0.05）,提升 IL-2、TNF-α水平（P＜0.05）,对大鼠具有较好的保健功能。5.包合物纳米微粒能够显著降低大鼠爬跨潜伏期（P＜0.05）,提高爬跨频次和射精频次（P＜0.05）,并且可以增大曲细精管直径（P＜0.05）,增加睾酮水平（P＜0.05）,进而增强雄性大鼠的生殖功能,但对第二信使cGMP无显著影响（P＞0.05）。6.肠道微生物结果证明,包合物纳米微粒作用效果与西地那非相当,与对照组相比,可以显著提高大鼠肠道微生物中UCG-005、瘤胃球菌属（Ruminococcus）及乳酸杆菌属（Lactobacillus）的相对丰度（P＜0.05）;能够通过改变肠道微生物β多样性,增强大鼠遗传信息的表达及对环境信息的处理能力,还能减缓细胞转化进程并弱化相关疾病基因的表达来提高免疫力。以上结果说明,饱和水溶液法可制备复方植物提取物-HP-β-CD包合物纳米微粒,制备的包合物安全无毒性,对大鼠具有良好的保健功能,能够通过改变肠道微生物群落结构,提高大鼠的免疫力;包合物能够显著提高雄性大鼠的生殖能力,其效果与西地那非相当。因此,本研究所采用的纳米药物载体技术对于保健品的开发与研究具有重要的推动作用,所形成的四种中药材的包合物作为保健品及补肾壮阳剂产品具有潜在的应用价值。
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