Hca-F榄香稀复合瘤苗抗原—卡介苗热休克蛋白复合物(H-HSP70)对小鼠树突状细胞的活化作用

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lx2000
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该实验室分别制备榄香稀复合瘤苗抗原(H<,TA>)与卡介苗HSP70(HSP70<,BCG>0),构建H<,TA>-HSP70<,BCG>复合物,免疫小鼠后对H<,TA>的攻击具有明显的保护效应.该实验用H<,TA>-HSP70<,BCG>在外冲击DC,观察H<,TA>-HSP70<,BCG>对DC的冲激作用及其抗原提呈功能的影响,探讨肿瘤抗原-HSP70<,BCG>瘤苗诱导抗瘤免疫的机制.方法:无菌取小鼠脏、骨髓制成细胞悬液,破红细胞,用含有GM-CSF和IL-4(浓度为100ng/ml)的1640培养基调成所需浓度2*10<,7>ml.37℃,5﹪CO<,2>培养2个小时.洗掉不黏附细胞后黏附细胞终结培养16-18小时.将培养的粘附细胞用1640培养基(不含血清)冲洗,洗出半粘附细胞,即富含树突状细胞的细胞组分简称突状细胞.正常小鼠脾、骨髓DC在体外用H<,TA>-HSP70<,BCG>、H<,TA>、HSP70<,BCG>进行刺激继续,培养3天.用MTT法测DC及其刺激的不粘附细胞的增殖活性,用电镜观察其形态学改变,用流式细胞仪测内吞FITC标记的dextran的DC的百分率.结论:结果表明H<,TA>-HSP70<,BCG>能够激活脾脏DC和骨髓DC,H<,TA>-HSP70<,BCG>冲激的DC比单用H<,TA>或HSP70<,BCG>冲激的DC有更强的刺激不粘附细胞和摄取抗原的能力.H<,TA>-HSP70<,BCG>可作为肿瘤疫苗诱导对肿瘤细胞的免疫应答.
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该实验用异种HSP及异种HSP肿瘤抗原复合物体外扩增人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),以期寻找一种新的有效的扩增γδT细胞的方法,并检测了所扩增的γδT细胞的亚型及细胞毒活性;用ADP化学连接法体外构建了HSP-Daudi肿瘤肽复合物并检测其活化的γδT细胞的增殖、细胞毒活性及分泌的细胞因子的水平.实验结果证明异种HSP对人外周
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