白内障是全球性首位致盲眼病，白内障囊外摘除或超声乳化吸除联合人工晶体植入术是目前首选的治疗方法。然而术后的远期并发症之一——后发性白内障(posterior capsule opacification，PCO)可导致视力再度下降，甚至致盲。并且后发性白内障也会影响人工晶状体新型材料的研发以及临床应用。目前，Nd: YAG激光或手术后囊膜切开术是后发性白内障的主要治疗手段，但这样不仅增加患者的经济、心理负担，而且有人工晶状体损伤、视网膜脱离、黄斑囊样水肿等并发症发生的危险[1-3]，并且残留的后囊膜混浊会影响眼后节疾病的诊疗。虽然仪器设备的不断改进、手术技巧的不断提高、人工晶状体的改良设计，使得后发性白内障的发病率有所下降，但都不能完全抑制晶状体上皮细胞(lens epithelial cells，LECs)的增殖，也就无法从根本上预防后发性白内障的发生。 用于研究防治后发性白内障的药物有抗代谢药物、细胞凋亡诱导剂等。虽然大量实验证实它们可有效抑制晶状体上皮细胞增殖，但传统的术中囊袋灌洗和术后结膜下注射等给药方式，药物随房水排出快，有效浓度维持时间短暂，且会对眼内其它组织产生毒性作用，这些都限制了药物的临床应用，目前仅局限于实验室研究以及动物实验水平。所以无论从公共卫生学角度还是临床防治角度，选择一种有效的后发性白内障防治措施是眼科领域的热点和难点之一。而药物缓释载体具有减少药物用量、降低峰浓度效应、延长药物作用时间、减弱或消除药物毒副作用等优势，是药物防治后发性白内障较理想的眼内给药方式[4-6]。 晶状体囊袋张力环(capsular tension ring，CTR)，作为白内障手术辅助工具，在临床实践中对晶状体不全脱位治疗有菲常独到的作用。晶状体囊袋张力环还有防治后发性白内障的作用。并且晶状体囊袋张力环可应用于后发性白内障囊袋模型的建立[7-9]。 为进一步探讨后发性自内障的药物防治措施，我们构建载药型晶状体囊袋张力环，将晶状体囊袋张力环作为药物缓释载体应用，药物稳定缓慢释放并发挥其有效的药理作用，联同张力环的机械性屏障作用，为防治后发性白内障进行一种创新性尝试。 MG132是一种针对泛素—蛋白酶体途径(ubiquitin—proteasomes pathway，UPP)的特异性醛肽类抑制剂，可逆的抑制蛋白酶体的糜蛋白酶样活力。MG132通过抑制NF—κB依赖性基因的转录、调节细胞周期、影响Caspase凋亡信号传导通路和JNK信号通路来发挥作用[10]。研究发现，MG132显著升高p21、p27水平、降低CDK2水平来抑制LECs的增殖，即使在含有TGF—β2、FGF—2和HGF的培养体系串，也有抑制增殖的作用[11]；MG132可诱导基质金属蛋自酶MMP—2、MMP—9下调来抑制LECs增殖以及上皮—间质转化(epithelial—to—mesenchymal transition，EMT)[12]。鉴于此，我们以MG132为研究药物、应用聚乳酸/羟基乙酸共聚物(PLGA)、晶状体囊袋张力环，构建载药型晶状体囊袋张力环，并将晶状体囊袋张力环植入猪晶状体囊袋进行体外培养，制备后发性白内障模型；观察载药型晶状体囊袋张力环对猪晶状体囊袋模型中LECs增殖、移行的影响，并评价上皮—间质转化标记蛋自的表达变化。 载药型晶状体囊袋张力环对晶状体上皮细胞增殖的影响——体外培养猪晶状体囊袋模型的研究 目的：研究载药型晶状体囊袋张力环对体外培养的猪眼晶状体囊袋模型中晶状体上皮细胞增殖的影响，探讨载药型晶状体囊袋张力环防治后发性白内障的可能性。 方法：聚甲基丙烯酸甲酯材料的晶状体囊袋张力环(ZTR12A，珠海艾格医疗有限公司)，浸提于含237.80μg/ml MG132的聚乳酸/羟基乙酸共聚物(PLGA)二氯甲烷溶液(w/v:10％)，真空抽干，制备载药型晶状体囊袋张力环。载药型晶状体囊袋张力环体外药物释放实验采用蛋白质BCA法检测醛肽类药物含量。连续环形撕囊晶状体超声乳化吸除术制备猪眼晶状体囊袋模型，并随机分为CTR组：植入未经处理的晶状体囊袋张力环(n=12)；CTR—PLGA组：植入表面包裹PLGA的晶状体囊袋张力环(n-13)；以及CTR—PLGA—MG132组：植入表面包裹PLGA—MG132的晶状体囊袋张力环(n=13)。晶状体囊袋模型体外培养3周，显微镜下观察后囊膜细胞移行面积，并照相记录，方格计数法计算面积；免疫细胞学检测上皮—间质转化标记物(纤维连接蛋白、α—平滑肌肌动蛋白)的表达差异；ELISA检测纤维连接蛋白表达量的差异；并行晶状体囊袋组织病理学检查以及晶状体后囊膜湿重测量。 结果：载药型晶状体囊袋张力环体外药物释放试验中，处理后1d、3d、7d的MG132含量分别为2.58±0.16μg/ml、2.01±0.21μg/ml、1.49±0.22μg/ml。CTR组、CTR—PLGA组晶状体囊袋模型，LECs经过2-3天的生长潜伏期后，分别在9.06±1.61天、9.83±0.76天完全覆盖后囊膜；随着培养时间的延长，后囊膜上细胞层次增加，囊膜皱褶增多；组织病理学检查可见薄层均质红染的后囊膜上被覆一层或多层排列紧密、核深染胞浆丰富的LECs。而CTR—PLGA—MG132组，经过4-5天的生长潜伏期后，即可见晶状体上皮细胞点片状脱落，呈现细小圆点状，仅少量LECs增殖；1周后，LECs片状脱落漂浮，后囊膜出现无细胞覆盖区；组织病理学检查可见均质红染的后囊膜上细胞排列松散，可见无细胞覆盖区，前后囊膜平整光滑。相比CTR、CTR—PLGA组，免疫荧光显微镜观察CTR—PLGA—MG132组纤维连接蛋白以及α—平滑肌肌动蛋白表达减少，胞体变圆、变小，细胞核体积变小。ELISA检测CTR—PLGA—MG132组囊袋模型纤维连接蛋白的表达量为25.14±3.73μg/mL，显著小于CTR组(106.86±22.34μg/mL)以及CTR—PLGA组(106.09±25.78μg/mL)，差异具有统计学意义(P<0.05)。CTR、CTR—PLGA、CTR—PLGA—MG132组晶状体囊袋模型中，中央区6mm后囊膜湿重分别为5.95±0.64mg、5.80±0.42mg、1.80±0.70mg，CTR—PLGA—MG132组明显小于CTR、CTR—PLGA组，差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论：相比CTR、CTR—PLGA组晶状体囊袋模型，CTR—PLGA—MG132组晶状体囊袋模型残留细胞在后囊膜上的移行面积、后囊膜湿重、纤维连接蛋白以及α—平滑肌肌动蛋白的表达均明显减少。CTR—PLGA—MG132，可有效抑制猪眼晶状体囊袋模型中晶状体上皮细胞的增殖，减少上皮—间质转化。栽药型晶状体囊袋张力环是白内障术后防治后发性白内障的一种创新性尝试。