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目的:观察电刺激大鼠小脑顶核(cerebellarfastigialnucleus,CFN)对视网膜缺血再灌注损伤中光感受器细胞的保护作用,对电刺激CFN治疗视网膜缺血再灌注损伤的治疗机制进行探索研究。
方法:SD大鼠随机分为电刺激组、缺血再灌注组和假治疗组。缺血再灌注组为单纯缺血再灌注,不做大鼠电刺激CFN预置电极模型,不进行电刺激;电刺激组,在做电刺激的动物模型后进行缺血再灌注,再灌注第1h用脑循环治疗仪电刺激大鼠CFN,刺激时间为1h;假治疗组在做电刺激的动物模型后进行缺血再灌注,只做大鼠CFN预置电极模型,不电刺激。缺血时间为0.5、1、2、3、4、5、6h,再灌注时间均为6h,电刺激均在再灌注的第1h进行。用彗星试验检测DNA损伤程度;免疫组织化学检测Caspase—3的表达,了解细胞凋亡情况。
结果:电刺激组各时间点与缺血再灌注组、假治疗组对应的各时间点Olive尾矩相比较,除0h、0.5h时间点无显著差异(P>0.05)外,其余时间点比较均有显著差异(P<0.05);缺血再灌注组各时间点与假治疗组相对应的各时间点Olive尾矩比较,无显著性差异(P>0.05)。组内的各时间点Olive尾矩相比较,除3h、4h组间无显著性差异外(P>0.05),余各组间均出现显著性差异(P<0.05)。彗星实验中,Olive尾矩越大,表明细胞损伤越严重;反之,损伤越轻。总体上,组内随着缺血时间的增加,Olive尾矩逐渐增大;但在0.5hOlive尾矩与0h比较有减小。
Caspase-3的表达,除0h为阴性表达外,余均在光感受细胞胞浆内呈阳性表达。光密度分析显示,各组间比较0h无显著性差异(P>0.05);缺血再灌注组与电刺激组各对应时间点相比较,各组间均出现显著性差异(P<0.05);假治疗组与电刺激组各对应时间点,各组间均出现显著性差异(P<0.05);缺血再灌注组与假治疗组各对应时间点,均无显著性差异(P>0.05);在6h电刺激组光密度大于缺血再灌注组和假治疗组。总体上,Caspase-3光密度值,在0-3h是逐渐增大;3-4h光密度值变化不大;4-6h光密度值逐渐降低。
结论:电刺激大鼠CFN对视网膜缺血再灌注损伤中光感受器细胞DNA损伤具有保护作用;缺血2h以内再灌注后立即进行电刺激CFN为最佳治疗时间;缺血4h前再灌注后立即进行电刺激CFN对于DNA损伤的保护有效。