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1抗马立克氏病病毒UL13蛋白特异性单克隆抗体的研制我们实验室在Genbank上查找出公布的马立克氏病病毒不同毒株的UL13基因序列,发现各种毒株的基因序列基本一致。利用DNAstar分析软件将CVI988病毒UL13蛋白基因序列翻译成相应的蛋白质。再利用分析软件对该蛋白质进行分析,得到其高亲水区、高抗原性表达区所在位点。选择其高抗原性、高亲水性肽段,合成小肽。利用合成的高抗原性、高亲水性小肽作为免疫原对小鼠进行免疫。经腹腔免疫注射8周龄雄性Balb/c小鼠。第一次免疫：完全佐剂与等体积的多肽混合,腹腔免疫,0.2-0.3ml/只,含多肽20ug/只。两周后第二次免疫：不完全佐剂与等体积的多肽混合,腹腔免疫,0.2-0.3ml/只,含多肽50ug/只。两周后第三次免疫：不完全佐剂与等体积的多肽混合,腹腔免疫,0.2-0.3ml/只,含多肽70ug/只。10天后第四次免疫：取一只balb/c小鼠.腹腔免疫,0.2-0.3ml,含多肽100ug/只。第四次免疫后72小时-96小时取小鼠脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合.利用小肽包被的ELISA板反复筛选阳性克隆,并经有限稀释法3次亚克隆。结果获得了4株特异性分泌抗马立克氏病病毒UL13蛋白的阳性杂交瘤细胞株,分别命名为MDV UL13-DE4,MDV UL13-CF8,MDV UL13-FB3,MDV UL13-EC3.这4株单抗能与MDV病毒发生间接免疫荧光特异性反应。并具有具有ELISA和Western-blot反应性。这些单抗的研制为UL13蛋白功能的相关研究奠定了坚实基础。2利用单克隆抗体研究MDV UL13为研究病毒复制表达过程中,UL13蛋白在细胞上的定位,病毒在复制过程中,UL13蛋白的功能以及表达含量。通过利用特异性的抗MDV UL13的单克隆抗体,运用间接免疫荧光试验、Western-blot试验,对CVI988弱毒疫苗感染鸡胚成纤维细胞进行了MDV UL13蛋白检测,以考察UL13的细胞定位。以及用Western-blot试验鉴定原核表达蛋白是否能反应。并且通过一种新的方法诱导表达邓旭芳所构建的大肠杆菌表达UL13蛋白,并运用小鼠多抗血清加以验证,使得纯化出的蛋白能够得到运用,开辟了纯化蛋白的新途径,为今后蛋白质激酶的纯化提供了新的方法,并为研究其激酶功能奠定了良好的基础。