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细胞凋亡是细胞的基本生命活动之一.研究细胞凋亡机制对于阐明各种生命现象以及相关疾病的发生具有重要的理论与实践意义.染色质的断裂与凝集是细胞凋亡过程中的一个重要变化.该论文利用来源于非洲爪蟾卵的非细胞凋亡体系,对细胞凋亡过程中染色质变化的机制进行了研究.我们首先克隆了爪蟾凋亡特异核酸酶XAD的抑制物IXAD.染色质DNA在核小体间发生断裂是细胞凋亡典型性生化变化.我们以往的工作显示,细胞色素c可以激活爪蟾卵提取物中凋亡特异核酸酶XAD在核小体间切割染色质DNA,但其机理不详.在该研究中,我们克隆了爪蟾XAD的抑制物IXAD.结构与功能分析表明,IXAD是DFF45/ICAD的同源物.IXAD在凋亡过程中被caspase3降解,释放出活化的XAD,将染色质DNA降解为核小体倍数大小片段.该过程与人、小鼠以及果蝇中相应核小体倍数片断断裂机制非常相似.我们鉴定了爪蟾卵提取物中与凋亡染色质DNA降解成大片段相关的断裂因子LDFF.染色质DNA断裂成50kb大片段也是细胞凋亡典型性生化变化之一.该过程发生在核小体倍数片段断裂过程之前.大片段DNA断裂形成的机制至今仍在研究之中.我们在爪蟾卵提取物中鉴定了一个相关因子,称为LDFF(large DNAfragmentationfactor).LDFF在凋亡过程中通过caspase-3途径激活,并且与核小体倍数片段形成因子XAD的生化性质明显不同,表明LDFF是一个新的核酸酶.由其生化性质鉴定分析,LDFF很有可能是DNaseⅡ同源物.我们还发现nucleoplasmin与凋亡过程中染色质凝集过程密切相关.染色质凝集是凋亡典型形态学变化之一.现今普遍看法认为染色质凝集由染色质断裂直接引起.我们在实验中发现染色质凝集与染色质断裂是两个独立的过程,两者不存在直接的因果关系,其中染色质凝集由一酪氨酸磷酸酶直接调控.该磷酸酶在凋亡过程中通过caspase-3途径活化,催化爪蟾卵提取物中诱导染色质去浓缩的nucleoplasmin发生去磷酸化,使其功能丧失,并从凋亡凝集染色质上解离出来.所以很有可能酪氨酸磷酸酶通过使Nucleoplasmin的功能丧失与定位变化来调节凋亡染色质凝集过程.