抗原致敏树突状细胞对小鼠黑色素瘤治疗及免疫保护的实验研究

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目的:通过肿瘤细胞裂解物冲击致敏树突状细胞(DCs)进行在体动物实验,为探索以DCs为基础的肿瘤生物治疗在临床上应用提供一些技术方法和实验依据。方法:从雌性小鼠长骨骨髓中分离并扩增DC, B16黑色素瘤细胞皮下接种建立荷瘤动物模型。采用黑色素瘤肿瘤相关抗原(TAA)使DCs致敏,以致敏的DC进行免疫预防及治疗荷瘤小鼠,观察抗原致敏DC 对荷瘤小鼠的防治作用,并用ELISA法检测小鼠血清TNF-α、IL-6水平。结果:1. 接种肿瘤细胞数5×105个/只的实验小鼠成瘤率为100%,接种细胞数为5×104个/只的小鼠成瘤率为60%,前者生存时间明显短于后者(P<0.01)。2. 对照组(甲组)和未致敏的DCs治疗组(乙组,DC细胞数5×105个/只)小鼠生存时间基本一致,肿瘤体积大小无明显差异。丙组和丁组(接种抗原致敏DC细胞数分别为5×105个/只和5×104个/只)小鼠生存时间明显延长(P<0.01),丙组生存时间较丁组延长(P<0.05)。甲、乙组小鼠肿瘤生长迅速,而丙、丁组肿瘤生长受到明显抑制(P<0.01),丙组肿瘤生长较丁组缓慢(P<0.05)。荷瘤小鼠的体重随时间逐渐减轻,甲、乙两组体重减轻明显,和丙、丁组比较有明显的差异(P<0.05),后期丁组荷瘤小鼠体重减轻较丙组明显(P<0.05)。3. 荷瘤小鼠血清IL-6水平比对照组高(P<0.05),有抗原致敏DCs治疗组血清IL-6水平升高明显(P<0.01)。荷瘤小鼠血清TNF-α较对照组降低(P<0.01),有抗原致敏DCs治疗组TNF-α水平明显升高(P<0.01)。4. 动物注射致敏DCs细胞数 1×105个/只(B组), 1×104个/只(C组)后接种肿瘤细胞,观察1个月均未见肿瘤生长,再次接种肿瘤细胞,B组仍无肿瘤长出,C组5只小鼠有肿瘤生长,但平均生存时间较对照组(A组)明显延长(P<0.01)。结论:小鼠成瘤率与接种肿瘤的细胞数有关,细胞数量越大成瘤率越高,宿主存活时间越短。肿瘤抗原致敏的DC对荷瘤鼠有治疗作用,而未致敏的成熟的DC则无明显的治疗作用。在一定细胞数的范围内治疗效果与致敏的DC数量有关,细胞数5×105个效果优于细胞数5×104个;经过抗原致敏的DC治疗,荷瘤鼠体内TNF-α、IL-6水平显著升高,提示抗原致敏的DC能够增强荷瘤小鼠抗肿瘤免疫反应。肿瘤抗原致敏的DC对荷瘤小鼠有免疫保护作用。
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