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乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染细胞后编码的一种具有反式激活作用的多功能蛋白,可调控多种肿瘤相关基因的表达,在肝癌的发生发展过程中发挥关键的作用。EZH2(enhancer of zeste homolog 2)是一种组蛋白甲基转移酶,能够通过介导组蛋白3第27位赖氨酸三甲基化(H3K27me3)修饰而导致基因沉默。大量研究表明EZH2在肝癌组织中呈高水平表达,且与肝癌进展密切相关,但其调控机制尚不清楚。本研究旨在初步探讨HBx调控EZH2表达的机制,以期为HBx相关的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的诊断和治疗奠定分子基础。在小鼠正常肝细胞系AML12细胞中,我们利用Western Blotting检测发现HBx可以明显上调mEZH2蛋白的表达水平,同时mEZH2的表达随细胞内HBx的增加而呈现上升趋势。为了研究HBx上调mEZH2表达的机制,我们利用重叠延伸PCR扩增获得mEZH2基因第一外显子上游约2500bp的调控序列,并以荧光素酶作为报告基因检测发现,在细胞内表达的HBx蛋白和由转导肽TLM(Translocation motif)介导进入细胞的HBx蛋白,都可以反式激活mEZH2启动子的活性。为研究HBx激活mEZH2启动子活性的机制,我们首先逐步截短mEZH2启动子,发现HBx主要通过-486/-214和-50/+1区域调控mEZH2启动子活性。继而我们寻找HBx激活mEZH2启动子活性所必需的转录因子,利用TRANSFAC 6.0数据库对mEZH2启动子区进行分析发现,在启动子-486/-214和-50/+1区分别存在典型的转录因子E2F1、Sp1和TBP结合位点;进一步将这些位点突变后,HBx的激活作用显著降低,初步确定HBx可能通过转录因子E2F1、Sp1、TBP上调mEZH2启动子的活性。进一步研究发现,利用RNAi方法敲低转录因子E2F1的表达后,HBx对mEZH2启动子-486/+22区的激活作用明显降低,同时HBx对mEZH2蛋白表达的上调作用也显著下降,而对突变体-381M的激活作用则无明显影响。这些结果提示HBx可能通过转录因子E2F1反式激活mEZH2启动子活性。总之,本研究发现HBx能够通过转录因子E2F1反式激活mEZH2启动子活性,进而上调mEZH2蛋白的表达,为从表观遗传学方面研究HBx的致癌作用提供了新依据。