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本论文由两部分内容组成,第一部分为幽门螺杆菌FAD依赖的胸苷合成酶的晶体结构解析与功能研究。
在缺乏thyA和二氢叶酸还原酶基因(folA)的细菌中,FAD依赖的胸苷酸合成酶(ThyX)在获得外源性胸腺嘧啶核苷酸途径中扮演了至关重要的角色,它与人体的胸苷酸合成酶(ThyA)结构和反应机理完全不同,选择性的阻断ThyX的功能可以导致相应病原体的死亡而不对人体构成危害,是一个良好的药物靶标。本文报道了来源于幽门螺杆菌的分辨率为2.5埃的ThyX-FAD-dUMP复合物晶体结构;明确了参与反应的底物与蛋白的结合方式以及参与结合底物的重要氨基酸,通过功能试验鉴定了一些参与催化过程的的氨基酸,建立了该酶的催化模型;同时也为基于结构的药物设计提供了大量有用的信息。
第二部分为幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统重要蛋白CagF的表达,纯化和结晶过程。Ⅳ型分泌系统由Cag致病岛编码,通过与宿主细胞表面的整合素受体作用进而将毒力因子CagA和肽聚糖转运至宿主细胞中。其中的一个重要组分CagF作为效应蛋白CagA的分子伴侣,在CagA的分泌和致病中发挥了重要作用。获得CagF蛋白的晶体结构,对进一步明确CagA的转运和分泌机制具有重要的指导意义。通过前期研究,在某些条件下得到了较小的晶体,进一步的优化正在进行中。