论文部分内容阅读
雷公藤内酯醇，亦称雷公藤甲素，是从雷公藤、昆明山海棠及东北雷公藤等植物中提取分离出来的环氧二萜内酯类化合物，是中药雷公藤的主要有效成分之一。雷公藤内酯醇具有广谱的抗肿瘤作用，对肝癌亦有良好的抑制活性。然而，由于它的水溶性低，造成其体内摄入与治疗有效性差，加之它的毒性强，极大的限制其在临床上的应用。本研究以雷公藤内酯醇为先导化合物，制备其衍生物雷公藤内酯醇丁二酸单酯，目的是在保持其抗肝癌活性的基础上，改善它的水溶性差及毒性大的问题，为扩大雷公藤内酯醇的临床应用范围及抗肝癌药物的研发提供理论依据。为了探讨雷公藤内酯醇衍生物的最优合成工艺，本课题对其制备工艺进行系统研究。目标化合物由雷公藤内酯醇与丁二酸酐在催化剂作用下发生酰化反应所制得。预试验参照文献报道进行，单因素试验重点考察反应温度、反应时间、反应物投料摩尔比及催化剂用量4个因素对反应的影响，在上述研究基础上，以目标产物的收率为评价指标，应用L9（34）正交试验设计的方法筛选最优制备工艺，结果为：雷公藤内酯醇与丁二酸酐投料摩尔比为1:12，反应温度35℃，反应时间48h，催化剂用量为45mg。该最优工艺反应条件温和，产品收率高，稳定可行，适合工业化生产。为了考察雷公藤内酯醇衍生物的主要理化性质，本课题对雷公藤内酯醇丁二酸单酯的溶解度和油水分配系数进行了研究。首先建立专属性强、稳定可靠的雷公藤内酯醇丁二酸单酯含量测定方法，然后采用摇瓶-高效液相色谱法测定其在不同pH介质中的溶解度及油水分配系数。结果显示：37℃时，雷公藤内酯醇丁二酸单酯在水中的溶解度为102.69μg/mL，在正辛醇-水中的油水分配系数为16.61（logP=1.22）。雷公藤内酯醇丁二酸单酯具有较好的水溶性和适宜的油水分配系数，与雷公藤内酯醇相比，在临床用药及新剂型开发等方面具有明显的优势。为了对雷公藤内酯醇衍生物的体外抗肝癌活性进行初步评价，本课题采用噻唑蓝比色法（MTT）考察雷公藤内酯醇丁二酸单酯对肝癌HepG2细胞增殖活性的影响，并与雷公藤内酯醇及顺铂的抗肝癌活性进行对比研究。试验结果显示，雷公藤内酯醇丁二酸单酯4个剂量（5、20、40、80nmol/L）对肝癌细胞增殖均有抑制作用，而且其抑制作用呈现剂量-效应关系及时间-效应关系的特点，另外，在相同剂量及相同作用时间下的试验数据显示其对肝癌细胞抑制活性要好于顺铂。预示雷公藤内酯醇丁二酸单酯在肝癌化疗药物开发方面具有广阔的应用前景。