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目的:应用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记技术示踪大鼠急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)时肠道细菌移位(bacterial translocation,BT)状况,并用天然蒙脱石进行肠道干预,研究其对BT、血中脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)浓度及单核细胞表面Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)表达的影响。方法:将50只粪便中不含有氨苄抗性细菌的SD大鼠随机分为五组:正常对照组(A)、生理盐水对照组(B)、肝衰竭模型组(C)、天然蒙脱石(思密达)预防组(D)和天然蒙脱石(思密达)治疗组(E)。A组不加干预,后四组大鼠灌饲增强绿色荧光蛋白(enchanced green fluorescent protein,EGFP)标记的大肠杆菌JM109进行示踪,后三组大鼠用D-氨基半乳糖(D-GalN)一次性腹腔注射制备大鼠急性肝衰竭模型,B组大鼠腹腔注射等量的生理盐水。D组大鼠在造模前连续三天灌饲思密达溶液,E组大鼠在造模后连续三天灌饲思密达溶液(0.12g/次,2次/天)。应用琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis,AGE)和激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)鉴定内脏分离出的细菌是否来源于肠道;采用双色荧光染色法,荧光素标记的抗TLR4/抗CD14对大鼠血液单核细胞表面TLR4及CD14分子进行免疫荧光染色,进行流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测;采用PE标记的抗大鼠巨噬细胞抗体,检测组织中巨噬细胞内GFP的平均荧光强度;检测肝功能和血中LPS浓度。采用SPSS13.0进行统计学分析。计量资料统计学描述采用x±s。组间指标差别检验采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。若方差不齐,采用Kruskal–Wallis H检验,组间两两比较采用Mann–Whitney U检验,多重检验校正采用Bonferroni校正。P<0.05为差异具有统计学意义。结果:通过AGE,间接证实了ALF大鼠存在肠道BT;通过LSCM的观察,直接证实了组织中的巨噬细胞吞噬了来自肠道的示踪菌。大鼠肝功能指标及LPS检测结果:与正常对照组比较,生理盐水对照组大鼠肝功能各项指标及LPS的差异均无统计学意义(P>0.05);与正常对照组比较,模型组、思密达预防组和思密达治疗组大鼠的丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBiL)和LPS增高,血清白蛋白(serum albumin,Alb)下降,经统计学处理有显著性差异(P<0.05)。与模型组比较,思密达预防组和思密达治疗组大鼠的ALT、AST、TBiL和LPS下降,Alb升高,经统计学处理有显著性差异(P<0.05)。思密达预防组和思密达治疗组大鼠比较,预防组大鼠的ALT、AST、TBiL和LPS更低,差异有显著性(P<0.01),Alb的比较差异无统计学意义(P=0.112)。大鼠血液单核细胞表面TLR4的表达结果:正常对照组、生理盐水对照组、模型组、思密达预防组和思密达治疗组大鼠TLR4表达分别为328.79±31.3、347.83±29.9、554.49±40.7、478.24±31.5和522.06±29.1。正常对照组与生理盐水对照组大鼠比较无显著性差异(P=0.20);模型组、思密达预防组和思密达治疗组与正常对照组大鼠比较,TLR4表达均显著增高(P<0.001);思密达预防组和思密达治疗组与模型组大鼠比较,TLR4表达显著降低(P<0.05);思密达预防组和思密达治疗组大鼠比较,TLR4表达更低(P=0.004)。各组织巨噬细胞内GFP的平均荧光强度检测结果:正常对照组与生理盐水对照组大鼠比较,各组织间无显著性差异(P>0.05);模型组、思密达预防组和思密达治疗组与正常对照组大鼠比较,GFP表达均增高,有显著性差异(P<0.05);思密达预防组和思密达治疗组与模型组大鼠比较,GFP表达降低,有显著性差异(P<0.05);思密达预防组和思密达治疗组大鼠比较,GFP表达更低,有显著性差异(P<0.05)。结论:ALF大鼠存在肠道BT,并伴随有LPS浓度和TLR4表达的增高,用天然蒙脱石进行肠道干预后可显著减轻BT发生率,降低LPS浓度与TLR4的表达水平,且预防性用药组表现更显著。