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目的构建融合基因蜂毒肽(melittin)与人变构白介素-2[M-IL-2(88Arg,125Ala)]表达载体,验证构建成功后将重组基因转染进宫颈癌He La细胞,神经胶质瘤U87细胞,检测融合基因[M-IL-2(88Arg,125Ala)]在这两种细胞中的表达以及检测重组蛋白对宫颈癌He La细胞,神经胶质瘤U87细胞的影响,为蜂毒肽和白介素2在肿瘤方面的基因治疗提供实验基础。方法设计PCR扩增引物,并在引物上添加相应的酶切位点,以p PICZαA/M-IL-2(88Arg,125Ala)为模板,使用PCR方法,获得实验所需要的M-IL-2目的片段。以p LEGFP-C1和p EGFP-N3为载体构建M-IL-2融合基因的真核表达载体p LEGFP-C1-M-IL-2(88Arg,125Ala),p EGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala)。使用质粒提取试剂盒提取重组质粒,采用双酶切和DNA序列的方法鉴定重组质粒,鉴定成功后,使用Lipofectamine 2000脂质体将重组质粒转染进宫颈癌He La细胞和神经胶质瘤细胞U87中。M-IL-2融合蛋白在宫颈癌He La细胞和神经胶质瘤U87细胞中的表达采用RT-PCR及Western blot的方法进行检测,表达验证成功后使用CCK-8的方法及流式细胞仪检测融合蛋白的生活学活性,检测其对宫颈癌He La细胞和神经胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响。结果重组质粒p LEGFP-C1-M-IL-2(88Arg,125Ala),p EGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala)经过酶切及DNA测序证实构建成功,经过RT-PCR及Western blot检测证实重组基因M-IL-2(88Arg,125Ala)可在宫颈癌细胞He La,神经胶质瘤细胞U87中表达,经过CCK-8实验及细胞流式仪分析融合蛋白在细胞内的表达对以上两种肿瘤细胞的增殖具有一定的抑制作用。结论真核表达载体pLEGFP-C1-M-IL-2(88Arg,125Ala),pEGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala)构建成功,融合基因M-IL-2(88Arg,125Ala)可在He La细胞和U87细胞中表达且融合蛋白M-IL-2(88Arg,125Ala)对宫颈癌细胞He La,神经胶质瘤细胞U87增殖具有一定的抑制作用,对Hela细胞的凋亡具有一定的促进作用,为融合蛋白M-IL-2(88Arg,125Ala)的进一步研究提供了实验基础。