创、烧伤感染一直是临床实践中一项十分重要的内容，每年都有大量的创烧伤患者入院治疗。在长期的临床治疗中发现，决定预后的关键就在于能否有效地控制创面感染。因为创面感染不仅会使创面加深而且会造成败血症的发生。由烧伤引起的组织感染，往往给局部的微生物生长繁殖创造了良好的环境，加之局部循环受到损害，影响了免疫因子和抗菌药物的进入，使针对全身感染的防治措施难以收到理想效果。而外用抗菌素如银锌霜和磺胺类药物，长期使用后一方面会对肝，肾产生毒性损害，引起白细胞减少症，另一方面，也会增加耐药性菌株，因而不宜长期使用，更不会收到稳定的效果。另外对于一些长期难愈的病理性创面，例如对于糖尿病性的溃疡创面，普通药物的深层给药受到很大局限且难以收到良好的效果，而利用细菌活菌本身强有力的繁殖和迁徙能力，就可以在创面的深层和夹缝部位发挥独特的作用，从而在某种程度上，减缓创面的进一步加深和感染的扩散。 采用生物防治手段来控制创、烧伤感染是一种全新的治疗观念，不仅可以避免上述外用药的副作用，而且在临床实践上的初步研究已收到了十分肯定的疗效，这方面研究与开发已显示出极大的发展潜力。本研究即是在这种理论指导下和结合临床治疗特点而着眼于研制一种用于外伤治疗的生态制剂。 本研究采用物理和中药复合诱变进而筛选出一株正常不致病的枯草杆菌—BS9920。该突变株较突变前对几种常见致病菌的抑制作用明显增强，而且对中药的蒽醌成分产生了一定的耐受性。同时对它的生物学特性及部分分子生物学特征进行了研究。 BS9920与此中药的有效提取成分配伍制成一新型活菌复合生态制剂，经大量体外及动物创伤模型治疗研究证明，该复合制剂对外伤感染具有明显的治疗作用，而且促进伤口的愈合，与同类制剂相比，在治疗及使用上都具有一定的优越性。它的基本作用机理可归结为两方面：一方面，通过细菌本身的大量增殖，形成一层生物保护膜来防止外来致病菌的侵袭，同时通过数量上的绝对优势，营养争夺，形成占位性保护而起到生物拮抗作用：另一方面，中药提取的有效成分的 8庆：丛会生在瞩刑的的用研瞩及活囱卤菌的悠困工用研究抗菌，消炎，生肌去腐的作用。复合制剂是通过两方面的协同增效来发挥作用的。对制剂的比较系统的研究表明它在控制创面感染方而具有突出的疗效并独具特色。安全及急性毒性实验表明，它在使用上是绝对安全可靠的，不会产生任何毒、剔作＊更不会诱发菌血症及远隔阶器的感染。这一新型复合制剂将有望成为一种理想的创、烧伤治疗外用生态制剂。 为了进一步改善并增强该活菌复合制剂在外伤治疗中的作用，本研究对BS9920进行了遗传性状上的改造。酋先，以枯草杆菌一大肠杆菌穿校质粒pHY07及枯草杆菌分泌型质粒载体 pUS 86转化 BS9920感受态细胞，怨立一个比较稳定的BS9920转化系统，并研究摸索出较佳的转化条件，在技术上为后面的工作做好准备。 选择人表皮生长因子（功吹V‘）作为导入8s992o中的日的堆因。人表皮生长因子（Human蜘ndrmal Growth l：uclor），也称尿抑拧素，足一类具有重要应用价值的生长因子。hEGI；可刺激表皮细胞和多种细胞的生长，促进细胞的分化。hEGF是一个含53个氨基酸，汉6kD大个的小肽 主要在十二指肠Bener氏腺产生。木研究采用 PCR技术合成了人衷皮生长闲子基因（hEGF gN），经DNA测序检验，证明合成的这一170hp左右的片段序列与已发衰的 hEGF’结构基因序列完全一致。随后将其诠接至枯草杆茵分泌型表达约体仰S！86，构建载体pUSE，并转化BS9920感受态细胞，经PCR快速鉴定及PCR·be－blot的进一步检测，证明己获得阳性重组菌株B聊20T。采用＊A广“I－标记）检恻了 hEGF在 BS9920T中分泌表达水平，具体测定了细菌发酵培养上清液中 hEGF的含量，证明培养上清中有一定水平的表达，但分泌的量不高。然而，在随后对于BS9920T中分泌的h皿F的活性检测中发现，少蜜的BS9920T垮养上清液就可在短时间内十分显著的促进人红白血病细胞K562的大显增殖和分化，K562细胞增加了一个数缴级，证明BS9920 ＠株可分泌表达只有较强生物学活性的外源hi｛（｝”迭岗。