【摘 要】
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目的:1.探讨食管鳞癌癌组织和癌旁组织中BMAL1时钟基因的表达水平差异,并进一步研究其与食管癌患者临床资料和生存之间的关系;2.探讨时钟基因BMAL1在KYSE150食管鳞癌细胞中的生物学作用。方法:1.收集2019年全年于我院行食管鳞癌根治术82例患者的癌组织和癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法、蛋白免疫印迹（Western blot）及免疫组化法分别检测2种组织中的时钟
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目的:1.探讨食管鳞癌癌组织和癌旁组织中BMAL1时钟基因的表达水平差异,并进一步研究其与食管癌患者临床资料和生存之间的关系;2.探讨时钟基因BMAL1在KYSE150食管鳞癌细胞中的生物学作用。方法:1.收集2019年全年于我院行食管鳞癌根治术82例患者的癌组织和癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法、蛋白免疫印迹（Western blot）及免疫组化法分别检测2种组织中的时钟基因BMAL1 mRNA及蛋白的表达水平及情况;以癌组织BMAL1 mRNA的相对表达量中位数为基准,将其分为低表达组（相对表达量＜6.94）和高表达组（相对表达量≥6.94）,比较2组患者的临床病理资料差异;采用Kaplan-Meier法分析低表达组和高表达组患者与无病生存期关系;采用COX比例风险回归模型分析食管鳞癌患者的临床病理资料。2.培养食管鳞癌KYSE150细胞;通过慢病毒、构建的过表达时钟基因BMAL1质粒及shRNA下调的过表达时钟基因BMAL1质粒（即过表达BMAL1-shRNA质粒）分别转染KYSE150细胞,构建时钟基因BMAL1过表达慢病毒质粒转染的细胞（实验组）、构建BMAL1过表达shRNA慢病毒质粒转染的细胞（回复实验组）以及仅转染慢病毒的细胞（对照组）;通过Western blot验证其转染效率;采用细胞计数盒（CCK-8）、克隆形成实验、划痕实验及Transwell实验分别检测3组细胞的增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力。结果:1.qRT-PCR实验回示:时钟基因BMAL1在癌组织及癌旁组织中均有表达,但癌组织BMAL1 mRNA相对表达量低于癌旁组织BMAL1 mRNA相对表达量（P＜0.05）;蛋白免疫印迹实验显示:癌组织BMAL1蛋白的相对表达量低于癌旁组织BMAL1蛋白的相对表达量（P＜0.05）;免疫组化实验显示:BMAL1蛋白阳性定位于细胞核,且食管鳞癌组织表达低于癌旁组织表达（P＜0.05）;Kaplan-Meier分析显示:BMAL1低表达组的中位生存时间（21个月）低于BMAL1高表达组的中位生存时间（＞30个月）（P=0.001）;食管鳞癌中BMAL1表达与患者临床特征、分期及生存之间的研究表明:BMAL1表达高低与年龄、肿瘤浸润程度、TNM分期、淋巴结转移、脉管侵犯和神经侵犯有关（P＜0.05）;单因素COX回归分析结果显示:年龄、肿瘤浸润程度、TNM分期、淋巴结转移、脉管侵犯、神经侵犯、BMAL1mRNA相对表达量与食管鳞癌患者总体生存期有关（P＜0.05）,将有统计学意义的差异因素纳入多因素COX回归分析结果显示:BMAL1 mRNA低表达（P=0.041）与TNM分期（P=0.002）是影响食管鳞癌患者预后的危险因素。2.KYSE150细胞Western blot法显示:对照组、实验组及回复实验组细胞构建成功（P＜0.05）;3组KYSE150细胞通过CCK-8实验、克隆形成实验、划痕实验及Transwell实验研究表明:与对照组及回复实验组比较,实验组的BMAL1蛋白表达升高,但实验组细胞的增殖、迁移及侵袭能力下降（P＜0.05）,表明上调时钟基因BMAL1表达能够抑制食管鳞癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,时钟基因BMAL1在食管鳞癌中具有抑癌作用。结论:时钟基因BMAL1在食管鳞癌组织中低表达,其表达水平与肿瘤恶性程度负相关,BMAL1表达水平对预测食管鳞癌患者预后具有重要作用。上调时钟基因BMAL1表达可抑制食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,时钟基因BMAL1在食管鳞癌中具有抑癌作用。
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