脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)主要是由小麦赤霉病菌产生的,对人畜具有很高毒性的微生物毒素。建立快速准确的检测方法,对于保障食品安全具有重要意义。本文研究了 DON单克隆抗体及化学发光酶免疫检测方法。通过合成脱氧雪腐镰刀菌烯醇半抗原,借助活泼酯法将卵清蛋白(OVA)与DON半抗原偶联,获得包被抗原;以偶联有牛血清白蛋白(BSA)的市售DON免疫抗原来免疫BALB/c小鼠;检测血清,选取免疫效果最好的小鼠,取其脾脏细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0进行细胞融合。经过多次筛选和亚克隆,以及对杂交瘤细胞上清培养液的检测,最终筛选出一株能稳定分泌抗DON单克隆抗体的杂交瘤细胞株5E8。抗体的亚型为IgG1,效价达到了 8×105,与结构类似的毒素间没有明显的交叉反应。通过筛选化学发光底物缓冲体系及增强剂种类,并优化增强剂、鲁米诺和氧化剂的浓度,确定发光增敏液的保存时间,最终配制出化学发光效果良好的底物溶液。在该溶液基础上,优化包被抗原以及抗体的浓度,选择合适的封闭物,并对pH值、离子强度、乙腈含量和羊抗鼠IgG的浓度等条件进行优化,最终确定的分析条件为:包被抗原稀释8000倍,DON单克隆抗体稀释5000倍,封闭物为3%脱脂奶粉,工作溶液为包含10%乙腈、pH 7.4、0.4MNa+强度的磷酸盐缓冲溶液,羊抗鼠IgG的稀释倍数为5000倍。在最优条件基础上,建立了脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的间接竞争化学发光酶免疫分析标准曲线。其检测下限IC10为0.5602μ吨/L,灵敏度IC50为18.62μ吨/L。在小麦、燕麦、玉米中添加DON标准品,进行检测分析,平均回收率89.47%-114.38%,而变异系数为5.71%-11.42%。对所建立的方法用气相色谱进行了评估,分析结果具有很高的相似度,相关系数R2大于0.99。制备了 DON酶标抗原,优化了包被抗体的浓度及酶标抗原的浓度,选择了合适的乙腈含量及竞争反应时间。在制备的化学发光底物溶液和酶标抗原的基础上,最终优化后的条件为:包被抗体稀释10000倍,酶标抗原稀释4000倍,体系的竞争反应时间为30min,工作溶液的乙腈含量为5%。在最优条件基础上,建立了脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的直接竞争化学发光酶免疫分析标准曲线。其检测下限IC10为0.6931μg/L,灵敏度IC50为30.46μg/L。在小麦、燕麦、玉米中添加DON标准品,进行检测分析,平均回收率88.57%-116.38%,而变异系数为7.31%-10.21%。对所建立的方法用气相色谱进行了评估,分析结果具有很高的相似度,相关系数R2大于0.99。分别使用几种药剂防治小麦赤霉病,采集发病的小麦样品,用本研究建立的间接竞争和直接竞争化学发光酶免疫分析方法对发病小麦中的DON含量进行检测。考虑漂移现象和基质效应对测定的干扰,要进行精确检测。将间接竞争和直接竞争方法的检测结果进行对比分析;且分别与市售呕吐毒素(DON)ELISA检测试剂盒的检测结果进行相关性分析。结果显示,两种化学发光酶免疫分析方法均能准确测定DON的含量,且与商品化试剂盒的ELISA方法有着良好的相关性,相关系数R2大于0.99。说明建立的化学发光酶免疫分析方法的检测结果可靠、准确,分析方法在田间小麦样品DON含量的检测方面有着良好的应用前景。